体外分子定向进化研究进展3.pdfVIP

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5·18 · 生物化学与生物物理进展   Prog. Biochem. Biophys.      2002 ; 29 (4) 体外分子定向进化研究进展 徐卉芳  张先恩  张用梅 ( 中国科学院武汉病毒研究所, 武汉 430071) A. E. G. CASS ( ) I mperial College of Science , Technology and Medici ne , South Kensi ngton , L ondon SW7 2A Y , U K 摘要  体外定向进化作为近几年发展起来的一种蛋白质改造新策略 , 可以在未知目标蛋白三维结构信息和作用 机制的情况下 , 通过对编码基因的随机突变、重组和定向筛选 , 获得具有改进功能或全新功能的蛋白质 , 使几 百万年的自然进化过程在短期内得以实现 , 因而是发现新的生物活性分子和反应途径的重要方法 , 已在短短几 年内取得了令人瞩目的成就. ( ) 关键词  体外分子进化 , 蛋白质工程 , DNA shuffling , 渐进切割法产生杂和酶 ITCHY , 基因组进化 学科分类号  Q81   大量定点基因突变实验表明 , 蛋白质功能和性 2  体外定向进化技术的演变和发展 质的改变来自于许多小的内部修饰的积累 , 这些小 的修饰或突变分布于较大的序列空间内. 人们试图 2 1  错误倾向 PCR 利用已有的结构生物学信息对蛋白质进行合理设计 错误倾向 PCR (error prone PCR) [2 ] 是一种简 (rational design) , 但蛋白质结构的复杂性极大地增 便快速地在 DNA 序列中随机制造突变的方法. 其 加了合理设计的难度. 更何况 , 对于大多数要改造 基本原理是通过改变传统 PCR 反应体系中某些组 的蛋白质来说 , 我们并不清楚其三维结构信息 , 不 分的浓度 , 或使用低保真度的 DNA 聚合酶等 , 使 能进行合理设计. 而近年来发展的分子定向进化 碱基在一定程度上随机错误引入而创造序列多样性 (molecular directed evolution) 策略属于蛋白质的非 文库. 本法的关键在于选择适当的突变频率 , 一般 合理设计范畴 , 它不需要事先了解蛋白质的三维结 为每个基因 2 ~5 个碱基替换. 另外 , 迭代错误倾 构信息和作用机制 , 而是在体外模拟自然进化的过 向 PCR 可使小的有益突变累积而产生大的提高. ( ) [2 ,3 ] 程 随机突变、重组和选择 , 使基因发生大量变 尽管这种方法已有不少成功的例子 , 但毕竟遗 异 , 并定向选择出所需

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