稳定过表达人KLHL31基因的H9c2细胞系的建立及鉴定.pdfVIP

第20卷第5期 激 光 生 物 学 报 Voi．20No．5 2011年 10月 ACTA LASER BIOL0GY SINICA 0ct．2O1l doi：10．3969／j．issn．1007-7146．2011．05．020 稳定过表达人 KLHL31基 因的 H9e2 细胞系的建立及鉴定 周军媚 ，叶湘漓 ，廖四芳 ，刘 明 ，吴秀山 ，王跃群 (1．南华大学药学与生命科学学院，湖南 衡阳421001；2．湖南师范大学 生命科学学院心脏发育研究中心，湖南 长沙410006) 摘 要 ：人类KLHL31基因是本实验室已克隆的基因，其蛋白质含有保守的BTB和串连重复的Kelch结构域， 实验表明人类 KLHL31在成体骨骼肌和心肌组织中特异表达 ，KLHL31蛋白的过表达可以抑制了AP一1与SRE 的活性。本文拟利用阳离子聚合物转染技术将重组表达质粒 pCMV—tag2B—KLHL31转染 H9c2细胞 ，通过 G418 筛选 ，RT—PCR和Westernblotting验证 ，建立稳定过表达 KLHL3l基因的细胞系H9c2一KLHL31，为研究KLHL31 在心脏发育及其相关功能提供有用的细胞研究模型。 关键词 ：人KLHL31；MAPK；H9c2；稳定细胞系 中图分类号：Q78 文献标识码 ：A 文章编号：1007-7146(2011)05-0681-04 EstablishmentandIdentification ofaHuman LH 31stable．Dver ExpressedH9c2CellLine ZHOUJunmei ，YEXiangli，LIAOSfiang，LIUMing， Xiushan，WANGYuequn (1．CollegeofPharmacyandLifeScience，UniversityofSouthChina，Hengyang421001，Hunan，China； 2．TheCenterforHeartDevelopment，CollegeofLifeSciences，HunanNormalUniversity，Changsha410006，Hunan，China) Abstract：HumanK 丑，J31genehasbeenclonedpreviouslyinourlab．andtheproteinproductcontainsaBTBdomain andaKeleh—repealdomain．ItwasreportedthatK，J舭 31especiallyexpressedinskeleta1andcardiacmusclesofadult tissues．InMAPK signaltransductionpathways．overexpressionof碰 日 31inhibitedthetranscriptionalactivitiesofAP一 1andSRE．ToconstructastableKLHL31一expressed H9c2 celllines． Thefusion expressionplasmid pCMV—tag2B一 碰 日 31wastransfeetedintoH9c2 cellbycationicpolymer．AfterscreeningculturebyG4l8．theoverexpressionof 舰 舭 31wasverifiedbyRT—PCR andWesternblotting．TheH9c2cellslinethatover—expressing ，J日 31stablywases— tablished Successfully．whichprovideacellmodelofrourstudythemolecularfunctionofKLHL31inheartdevelopment．