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糖化血红蛋白的基础知识培训 HbA1c定义 HbA1c: 葡萄糖与血红蛋白β链氨基酸末端的6个氨基酸结合产生的一种特定的糖化血红蛋白 血红蛋白被糖化后，氨基酸末端所带负电荷会增加 HbA0：没有结合葡萄糖的血红蛋白β链氨基酸末端的6个氨基酸 HbA1c以百分比表示，即以和葡萄糖结合的血红蛋白占全部血红蛋白的比例 正常参考范围：4%-6%（NGSP/DCCT标化的方法） 糖化血红蛋白的生物合成过程（两步） 离子交换色谱所分离的组分解释（非糖尿病样本） 色谱图举例 小结 什么是HbA1c和HbA0？ A1c被糖化后什么电荷增加了？为什么糖化血红蛋白在A0峰之前被洗脱下来？ 测量糖化血红蛋白为什么要先对样本溶血？ HbA1c是如何计算的？ 成人血红蛋白包括哪几种？ HbF是什么？浓度高时是否会对A1c造成干扰？为什么？ 伯乐的糖化试剂能报告HbF吗？为什么？ 糖化的血红蛋白包括哪几种？ HbA1c实验室检测方法 各检测方法的分析物 离子交换HPLC 检测糖化血红蛋白HbA1c的金标准方法 DCCT研究中唯一所采用的HbA1c检测方法 NGSP标准化的参考方法 检测原理： 基于HbA1c 与其它血红蛋白组分所带电荷不同，在一定的缓冲液离子强度下可与分析柱树脂表面偶联的离子基团有不同程度的结合，从而将HbA1c与其它组分(HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0) 区分开而得到分离。 离子交换HPLC检测原理 离子交换HPLC的特点 采用离子交换原理基于HPLC的平台 HPLC方法的试剂组成包括：分析柱、缓冲液、校准品 采用分析柱内填充的离子交换树脂作为固定相，树脂上面偶联了带电荷基团 以可形成不同离子强度洗脱梯度的缓冲试剂作为流动相。 溯源性由试剂盒配套的校准品保证 分离效果的影响因素 分析柱内的填充物（颗粒越小，分离效果越好，速度越慢） 分析柱柱长（越长，分离效果越好，速度越慢） 硼酸亲和色谱法 血红蛋白被糖化后，会产生一个特殊的顺式二糖醇基团，该基团可与分析柱上的硼酸基团之间特异和可逆的结合； 而非糖化血红蛋白（A0）不与分析柱结合，最先被洗脱出来 从而实现糖化成分与非糖化成分分离，检测物为总糖化血红蛋白 HbA1c的结果是计算出来的 硼酸亲和HPLC的优缺点 优点： 仅区分糖化和非糖化，不受变异体的检测干扰 缺点： 非直接检测HbA1c，HbA1c存在计算错误的可能 胎儿血红蛋白高的病人结果偏低 血红蛋白变异体纯合子（如HbSS）的病人仍然报告HbA1c 不能区分血红蛋白变异体，无法给临床以额外的信息 免疫分析法 抗原抗体反应 试剂有一种特有的凝集物导致抗体-乳胶的凝集，浊度增加 HbA1c与抗体-乳胶的结合对凝集物的凝集有抑制作用，浊度降低 免疫分析法的特点 基于生化分析仪的平台（需要手工预处理样品） 精密度一般较差（CV%5%） 只报HbA1c一个数值，不能检测血红蛋白变异体 高血红蛋白F样本的HbA1c检测结果偏低 严重的黄疸和高脂血影响比色结果 国产糖化试剂的非标准化问题 小结 糖化血红蛋白的主要检测方法有什么？检测产物分别是什么？ HPLC的中文全称是什么？ HbA1c检测的金标准方法是？为什么？ 离子交换HPLC的检测原理是基于什么的不同？检测试剂应该包括哪些主要的组分？ 分析柱中填充的是什么？上面偶联了什么？不同缓冲液的区别是什么？ 不同离子交换HPLC方法的分辨率一样吗？分辨率的关键影响因素是什么？ 糖化血红蛋白检测结果的溯源性由哪种试剂保证？ 伯乐糖化产品的色谱图横坐标是什么？纵坐标是什么？ 硼酸亲和色谱法的检测原理是基于什么？色谱图有几个峰？分别是什么？ 硼酸亲和色谱法是怎么检测HbA1c的？ 免疫法检测糖化血红蛋白的原理是基于什么反应？ 国产免疫法试剂的缺点有哪些？ HbA1c实验室检测干扰因素 方法学特异的干扰因素 血红蛋白变异体 (如.HbS, HbC， HbD, HbE) 血红蛋白衍生物 (乙酰化、甲酰化衍生物等) 长期服用阿斯匹林的病人，体内乙酰化Hb高，结果偏高 肾衰病人的氨甲酰基化，导致结果偏高 Schiff碱（A1c中间产物） 某些血糖浓度急剧变化的1型糖尿病人，Schiff碱升高， 胎儿血红蛋白HbF 严重的黄疸、高血脂 血红蛋白变异体的发生率 全世界已经发现了超过一千种血红蛋白变异体 全球的血红蛋白变异体发生率的最新数据是7%* 非洲裔美国人：HbS 7.8%；HbC 2.3% 1988年,2.5‰ ,河南** 2001年,3.2 ‰ ,丝绸之路*** 云南：4% 云南省的阿昌族HbE的发病率为41.2% 血红蛋白变异体对HbA1c结果准确性的影响 对部分方法的检测结果准确性有影响