食品微生物学第四章微生物遗传与菌种选育.pptVIP

微生物遗传与菌种选育 在啤酒酿造中，用上面酵母和下面酵母杂交，得出的杂种可生产出浓度和香味更好的啤酒等。以上这些酵母均具有不同的交配型，因而都是通过有性杂交获得。对于无典型有性生殖的酵母菌如假丝酵母，可通过准性生殖过程进行杂交。但是酵母菌的杂交育种中大多数为有性杂交。 酵母菌通过有性杂交进行杂交育种主要包括子囊孢子的形成、子囊孢子的分离和酵母杂交种的获得三个步骤。 微生物遗传与菌种选育 4.2.3.2 霉菌的杂交育种 在发酵工业中应用的霉菌大部分是属于半知菌，它们不具有典型的有性生殖过程，因此霉菌的杂交育种主要是通过体细胞的核融合和基因重组，即通过准性生殖过程而不是通过性细胞的融合。例如：通过对黑曲霉的杂交育种，得到了多倍体的新种，其柠檬酸产量比原始菌株高几十倍；酱油曲霉通过体细胞的重组及多倍体化，提高了蛋白酶的活性等。目前霉菌的杂交育种主要是在种内，偶尔有种间的。但亲本菌株的亲缘关系越远，则越不易成功。 霉菌的杂交育种的步骤选择直接亲本、异核体的形成、转移单菌落和双倍体的检出。 微生物遗传与菌种选育 4.3.4 原生质体融合育种 原生质体融合指通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体融合在一起，进而发生遗传重组，产生同时带有双亲性状的、遗传性稳定的融合子的过程。原生质体融合是在20世纪70年代以后才发展起来的一种育种新技术，是一种有效的转移遗传物质的方法。 能进行原生质体融合的细胞是极其广泛的，无论是真核微生物还是原核微生物都可以进行原生质体融合，甚至是高等动植物也可以进行。 原生质体融合的优点有；重组率高，遗传物质的传递更加完整，可以实现远亲缘的菌株间的基因重组，还可以进行多细胞间的基因重组。因此，现在正得到越来越广泛的应用。 微生物遗传与菌种选育 4.3 微生物菌种保藏法及复壮 4.3.1 微生物菌种保藏方法 在微生物发酵工业中，具有良好性状的生产菌种的获得十分不容易，如何利用优良的微生物菌种保藏技术，使菌种经长期保藏后不但存活健在，而且保证高产突变株不改变表型和基因型，特别是不改变初级代谢产物和次级代谢产物的高产能力，即很少发生突变，这对于菌种极为重要。 微生物遗传与菌种选育 4.3.1.1 菌种保藏原理 微生物菌种保藏技术很多，但原理基本一致。首先挑选优良纯种，最好是它们的休眠体（如分生孢子、芽孢等）；其次创造一个有利于休眠条件，如采用低温、干燥、缺氧、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂等方法，使微生物生长在代谢不活泼，生长受抑制的环境中。 微生物遗传与菌种选育 4.3.1.3 1．菌种保藏方法 （1）低温保藏法 主要是利用低温对微生物的生命活动有抑制作用的原理进行保藏。根据所用的温度高低可分为两类：一类是普通低温保藏法，即将斜面菌种或菌种悬浮液直接放入0～4℃冰箱保存，但时间不宜太长，如放线菌每3个月移接一次；酵母菌每4～6个月移接一次；霉菌每6个月移接一次。另一类是利用低温进行冻结保藏法，如用-20℃以下的超低温冰箱、干冰或液氮保藏，为了保藏的结果更加令人满意，通常在培养物中加入一定的冷冻保护剂；同时还要认真掌握好冷冻速度和解冻速度。冷冻保藏的缺点是培养物运输较困难。液氮保藏菌种的存活率远比其他保藏方法高且回复突变的发生率极低。由于其温度可达到-1950C，因此液氮巳成为工业微生物菌种保藏的最好方法之一。 微生物遗传与菌种选育 （2）干燥保藏法 此法适用于产孢子或芽孢的微生物的保藏。是将菌种接种于适当的载体上，如河砂、土壤、硅胶、滤纸及麸皮等，在干燥的条件下进行保藏。如果将这些干燥的载体在低温下或是抽气后密封保藏则效果更好。最常用的是沙土保藏法。 （3）隔绝空气保藏法 利用好气性微生物无氧不生长的原理，这类方法比较简便，有时也能达到良好的效果。先用灭菌的液体石蜡注入菌种斜面，再用固体石蜡封口以隔绝空气，最后放入低温冰箱保藏。也可不用石蜡，在成熟的斜面菌种采用灭菌的橡皮塞代替棉塞封口。 微生物遗传与菌种选育 （4）真空冷冻干燥法 在这类保藏法中，利用了一切有利于菌种保藏的因素，如低温、缺氧、干燥等，因此是目前最好的综合性保藏方法，保藏期长。但需要一定设备条件，且操作过程复杂。基本过程：培养菌种→加菌种保护剂（食品工业菌种多采用牛乳作保护剂）→分装、预冷冻→真空冷冻→真空封口。真空冻干的菌种可在常温下长期保藏。 （5）寄主保藏法 ?适用于一些难于用常规方法保藏的动植物病原菌和病毒。 微生物遗传与菌种选育 4.3.2 环境微生物菌种的退化和复壮 4.3.2.1 菌种的退化 随着菌种保藏时间的延长或菌种的多次转接传代，菌种本身所具有的优良的遗传性状可能得到延续，也可能发生变异。