农杆菌介导脂滴包被蛋白基因83转化烟草研究.docVIP

中国难学ｃ墨报  ２０１２，２８（０３）：２４０一２４４ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｍｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ 农杆菌介导脂滴包被蛋白基因脚转化烟草的研究 牛伯庆，汪文静，宋洪英，谢响明 （北京林业大学生物科学与技术学院，北京ｌ０００８３） 摘要：为开发新的抗茵核病基因，针对抗病相关的脂滴包被蛋白基因蹦，设计了分别带有酶切位点 ｘｂａ Ｉ和ＢａＩ埘Ｉ的１对引物，从克隆载体ｐＭＤｌ９．Ｔ－８．３中扩增到基因蹦，双酶切蹦并连接到植物表达 载体ｐＢＩ 蹦基因转化到烟草中；获得了３５株抗性转化株，ＰｃＲ及测序分析鉴定阳性植株为２１株，Ｒ１二ＰｃＲ检测 到基因占０在其中能够表达；通过接种核盘茵和草酸处理试验，表明蹦基因可使烟草提高了草酸耐受 水平，从而对茵核病具备一定的抗性。本实验研究了潜在功能基因口，的抗病性，为植物抗菌核病的研 究奠定了基础。 关键词：脂滴包被蛋白；农杆菌介导的转化；转基因烟草；核盘菌；抗性 中图分类号：Ｑ８１２ 文献标志码：Ａ 论文编号：２０１１—３１３３  Ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉＯｎ ｏｆ Ｔｏｂａｃｃｏ ｗｉｔｈ Ｐｅｒｍｐｉｎ Ｇｅｎｅ孚一 Ｉｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ａ霉ｎ砌ｃ“Ｍ妇组ｍｅｆ叠ｃｆ套瑚 Ｎｉｕ Ｂｏｑｉｎｇ，Ｗａｎｇ Ｗｅｎｊｉｎｇ，Ｓｏｎｇ Ｈｏｎｇｙｉｎｇ，Ｘｉｅ Ｘｉａｎｇｍｉｎｇ （ｃ０№ｇｅ Ｑ厂曰ｉｏｆ０冒ｉｃｎｆ＆ｉｅ船船。以Ｂｉｏ￡ｅｃ危加ｆｏ肼Ｂｅ玎ｉ愕肋ｒｅ盯‰ｉ＂ｅ搿ｉ玑Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８３） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ６ｎｄ ｎｅｗ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｐｅｒｉｌｉｐｉｎ ｇｅｎｅ占—３ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ５ｒｃ，ｅｒ０如西ｓｃ＇，ｅ，Ｄｆｊｉ埘埘，ａ ｃｏｕｐｌｅ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｚｙｍｅ ｓｉｔｅｓ ｏｆ Ｘｂａ Ｉ ａｎｄ ＢａｍＨ １ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ｃｌｏｎｅ ｔｈｅ ８—３ ｆｒｏｍ ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒ ｐＭＤ １ ９一Ｔ一８—３，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗａｓ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ａｎｄ ｌｉｇｎａｓｅｄ ｗｉｔｈ ｐｌａｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＢＩ １ ２ １． Ｔｈｅ ｐＢＩｌ２１—８—３ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ＬＢＡ４４０４ ａｎｄ ｔｈｅ占一３ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ＾％ｏｆ扬妇ａ ｆａ６ａｃ脚８９ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ａ胃ｍ６ａｃｆ翻“埘ｆｕ埘幽西即ｓ．３５ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｌｉｎｅｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ，２ １ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ ｂｙ ＰＣＲ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｔｈｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＲＴ—ＰＣＲ ｗａｓ ｃｏｎｆｉ瑚ｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ８—３ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｔｏｂａｃｃｏ ｉｎｆｂｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ５ａＺ啪如面ｓｃ７ｅ＿ｒ０血．０脚ｎ，ａｎｄ ｏｘａｌｉｃ ａｃｉｄ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ占－０ ｃｏｕｌｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｐｌａｎｔｓ７ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｌｅｖｅｌ ｔｏ ｏｘａｌｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｓｅ如ｒＤｆ而白＿ｓ如如删埘ｔｏ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｅｘｔｅｎｔ，ｗｈｉｃｈ １ａｉｄ ｔｈｅ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ口０ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｐｌａｎｔ Ｙｅｓ试ａ¨ｎｃｅ协Ｓｃｉｅｒｏ娃ｎｉａ ｓｃｌｅＤｏｔｉ０１．ｕｍ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｅｒｉｌｉｐｉｎ；ｔｒａｎｓｆｏ瑚ａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ａｇｍ６ａｃｆｅ矗“埘ｆｕ埘幽西鲫ｓ；ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｔｏｂａｃｃｏ；＆如ｒｏｆ扬西 ｓｃ厶粕矗ｂｎＪ埘：ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ０引言 核盘菌（＆，ｅ，Ｄ砌面ｓ订ｅ＿ｒＤ巧Ｄｒｕ埘）可引起严重的 植物病害菌核病，其宿主范围非常广泛，包括十字花 科、豆科、茄科等在内的４００多种植物，导致植株腐 烂枯死，降低作物产量，每年造成重大经济损失¨。】。  菌核病主要依靠农药防治，由于抗病品种资源较少， 病原菌在重灾区逐渐出现耐药性，防治效果有限，生 物防治和植物基因工程是目前的研究热点，已报道 将几丁质酶（ｃｈｉｔｉｎａｓｅ）、葡聚糖酶（肛１，３一９１ｕｃａｎａｓｅ）、