出口蜂蜜中稳定碳同位素测定方法 液相色谱_元素分析-同位素比值质谱联用法编制说明.docVIP

《》 编制说明 标准制定的任务来源及意义 1、任务来源 本标准是根据国家认证认可监督管理委员会下达的任务名称为《进出口中》，计划编号为20B154，由中华人民共和国江苏出入境检验检疫局负责制定2、制定标准的意义 近年来目前国际上用于产地溯源鉴别食品成分掺假的一种直接而有效的工具C3和C4两种代谢途径的产物碳同位素比值（δ13C值）有较大差异，利用这个差异可以通过测定蜂蜜的δ13C值，能够鉴别蜂蜜（主要含C3植物糖）中是否掺入的C4植物糖浆（如玉米糖浆、甘蔗糖浆）。现在国际上通用的是元素分析仪-同位素质谱法（EA-IRMS）（C-IRMS）IRMS在线测定各个组分的δ13C值。这样可以克服之前离线方法的缺点，提高检测方法的灵敏度，并且可以对C3植物糖的掺假进行鉴定。目前国外著名检测机构Applica已利用液相色谱/元素分析-同位素质谱法来鉴别蜂蜜的掺假，提出了纯正蜂蜜的同位素比值应该满足的要求[5-8]，而我国还没有相应的国家标准来鉴别蜂蜜掺假。因此迫切需要制定相应的标准来规范我国的蜂产品市场，同时通过建立同位素值数据库，为我国有关部门进一步开展的品质、来源以及所标注的产品名称、产地和加工过程真实性的工作提供科学根据和基础，在保护消费者利益方面起重要作用。二、编制依据 本标准的编制遵循GB/T 1.1-2000《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》和GB/T 20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》的要求进行编写制订的。三、标准制定过程 本标准起草单位在20年月收到认监委的任务下达文件后，成立了标准起草小组，第一起草人任组长，对小组成员进行了分工，并制定了时间进度表（见表）。 本标准起草人通过查询相关资料和文献，结合实际情况，建立了中的液相色谱-同位素质谱测定方法，经实验研究验证后，方法能满足的检测要求。 表 本标准制定工作时间进度安排 时间 工作内容 完成情况 20.4 ~2011.5 查阅并整理相关文献资料，购买标准品或样品；确定标准的技术路线。 完成 20.4~2011.5 优化前处理条件和检测条件；进行方法室内和室间验证，起草标准征求意见稿。 完成 20.5~2011.6 征求意见，汇总意见，形成送审稿。 完成 四、主要试验技术论证 本标准利用（C/EA-IRMS）适用范围包括、、、、、、等。、Δδ13Cp-h、果糖、葡萄糖δ13C值之差Δδ13Cfru-glu以及各个组分δ13C最大差值Δδ13Cmax，根据上述三个参数的阈值来确认蜂蜜是否掺假。 同时为了研究不同蜜种纯正蜂蜜混合后的样品是否符合Applica实验室提出的判定准则，本标准选取了四种纯正蜂蜜（油菜、洋槐、椴树和葵花）按照不同的比例制备混样，共11个。混合比例见表2。 表2、四种蜜种纯正蜂蜜混合比例表 样品 比例 % 油菜-洋槐 75-25 50-50 25-75 油菜-椴树 75-25 50-50 25-75 洋槐-椴树 75-25 50-50 25-75 油菜-洋槐-椴树 30-30-40 油菜-洋槐-葵花 30-30-40 同时将一个糖浆与一个纯正油菜蜜按照不同比例混合，利用本标准的方法进行检测，蜂蜜和糖浆混合比例分别是95%/5%，90%/10%，85%/15%。 1、（EA-IRMS） 元素分析-同位素质谱法用于测定蜂蜜整体同位素值δ13Ch和蜂蜜中蛋白质同位素值δ13Cp。样品中的碳元素经元素分析仪高温燃烧后转化为CO2，经过净化和干燥后通过同位素质谱仪测定样品的δ13C值。本标准的样品前处理主要参照AOAC 998.12和GB/T 18932.1-2002进行操作。 对于蜂蜜整体δ13C值的测定，采用微量进样器移取一定量的未稀释蜂蜜于锡杯中即可。蜂蜜中蛋白质δ13C值的测定时，需要将蜂蜜中的蛋白质提取出后烘干才能进行测定。 蛋白质沉淀剂的选取参照上述两个标准，采用钨酸钠溶液和硫酸溶液，确保蜂蜜中蛋白质充分沉淀后，离心弃上清液后加水清洗蛋白质。由于蜂蜜中糖的水溶性大大高于蛋白质的水溶性，反复用水清洗可确保蜂蜜中的糖没有影响蛋白质δ13C值的测定。将清洗后的蛋白质烘干后碾磨混匀后进行制备，可确保蛋白质δ13C值测定的取样代表性，从而能获得准确的结果。 使用元素分析-同位素质谱测定样品的同时通过测定标准样品的δ13C值进行质量控制，每个批次的检测样品间隔对标准样品进行测定，确保测得的标准样品的δ13C值与标准物质证书标注值相差小于±0.30 ‰。 2、（-IRMS）液相色谱-条件测定样（δ13Cfru、δ13Cglu、δ13Cds、δ13Cts）δ13C值（具体流程见图1）。测定方法主要参考Applica实验室的方法。 由于本标准测定的是碳同位素比值，因此流动相不能含有有机物和其他含碳的无机盐