出口花粉中链霉素和双氢链霉素的检测方法.docVIP

fI前 言 本标准是根据GB/T1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》、GB/T20001.4-2001《标准编写规则 第4部分：化学分析方法》和SN/T 0001-1995 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局。 本标准主要起草人： 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。出口花粉中链霉素和双氢链霉素的测定方法 液相色谱-质谱／质谱法 范围 本标准规定了出口花粉中链霉素和双氢链霉素的液相色谱-质谱／质谱法 本标准适用于出口中。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 方法提要 样品中的链霉素和双氢链霉素经提取溶液提取，三氯甲烷沉淀样品中的蛋白质，清液过C18小柱净化后用液相色谱-质谱／质谱法GB/T 6682中规定的一级水。 甲醇：。 叔丁基甲基醚。 甲酸：高效液相色谱级。 正己烷。 三氯甲烷。 乙酸铵：CH3CO2NH4 , 高效液相色谱级。 庚烷磺酸钠。C7H15SO3Na。 磷酸钠。Na3PO4·(H2O)12。 提取溶液：准确称取10.1 g（.7），用水溶解并转移至00 mL容量瓶中，加mL磷酸（.2），用水定容至刻度。准确取（.3），。5‰，V/V）准确取（.4），至00 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 准确称取g乙酸铵（.7），用水溶解并转移至00 mL容量瓶中用水定容至刻度。3+7，V/V）标准品Streptomycin Sulfate，(C21H39N7O12)2·(H2O)3纯度98 %。 双氢链霉素标准品（Dihydrostreptomycin Sesquisulfate Hydrate, (C21H41N7O12)2·(H2O)3，CAS No：5490-27-7）纯度99 %。 标准储备液：准确称取适量的，用配制成浓度为1 mg/mL的标准储备溶液。℃保存。 ：准确移取一定体积的标准储备液μg/mL，0～4℃保存。移取一定体积的μg/mL，现用现配。滤膜：0.45 μm 仪器和设备 液相色谱质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。离心机涡旋混合器。 具塞塑料离心管:50 mL试样制备和保存20目分析步骤 .1样品处理 7.1.1提取 称取g试样(精确到0.01 g)置于具塞塑料离心管中，加入（.10）mL，000 r/min高速离心min。取上层液收集于， 将C18小柱(预先用5 mL甲醇，5 mL水活化)连接于20 mL塑料针筒下，将样液以1-2滴/秒的流速全部通过C18小柱，在样液在小柱上还剩约2 mL左右时，加入5 mL水以1-2滴/秒的流速淋洗小柱，直至空气流经小柱，弃去流出液。去除针筒，加压抽干约3 min后加3 mL叔丁基甲基醚-正己烷溶液(4.11)以1-2滴/秒的流速淋洗小柱，弃去流出液，加压抽干约5 min后加入5 mL甲醇以1滴/秒的流速洗脱于10 mL试管中。该洗脱液于45℃下氮气吹干，加入0.02 mol/L乙酸铵溶液1.0 mL溶解残渣，充分涡旋混合后过0.45 μm水相滤膜（4.21），供液相色谱-质谱／质谱仪测定。 7.1.3 基质标准溶液的制备 称取5份约2 g阴性试样（精确至0.01 g）置于具塞塑料离心管中 测定 .1液相色谱条件 a）色谱柱:mm×100 mm，5μm或相当者；b）流动相:（.12）乙酸铵溶液（.13） c）流速: μL /min； d) 进样量: μL； e）柱温：35℃；质谱条件 )； b) 质谱扫描方式：多反应监测 (MRM)； c) 其他参考质谱条件见附录B中的表B1。 7.2.3液相色谱-质谱/质谱测定 在上述色谱条件下，如果检测的色谱峰保留时间与标准品，与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表 规定的范围，则可判定样品中存在。% >20% 至 50% >10% 至 20% ≦10% 允许的相对误差 ±20% ±25% ±30% ±50% 7.2.3.2定量测定 按照液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，标准曲线法测定样液中的被测物的含量。样品中被测物量应在标准曲线范围之内，如果含量超出标准曲线范围，应适当稀释至标准曲线范围之内进行检测。标准的质谱图见附录C中的图C.1 7.3空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。结果计算和表述 采用法定量，用色谱数据处理机或按式（1）计算样品中待测物量。计算结果需扣除空白值。 　 A1·c1·V1 X1 = ………………………（1） As1·m1