选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬对血管平滑肌增殖的影响.docVIP

选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬和雌激素对血管平滑肌增殖的影响 中山医学院临床医学系 杨家君 李伟念 摘要 目的:观察选择性雌激素受体调节剂雷洛昔芬和雌激素(17β-雌二醇)对血管平滑肌增殖的影响, 探讨雷洛昔芬和雌激素(17-β雌二醇)抗动脉粥样硬化的可能机制.方法:取大鼠胸主动脉中层平滑肌细胞采用组织块培养法进行细胞培养,加入不同浓度雷洛昔芬和雌激素(17β-雌二醇),光镜下细胞计数,观察它们对VSMC增殖的影响.结果: 雷洛昔芬组和雌激素组VSMC的细胞计数结果明显低于空白对照组.结论:雷洛昔芬和雌激素都能明显地抑制VSMC的增殖. 关键词: 雷洛昔芬; 雌激素;血管平滑肌;增殖; 细胞计数 临床上动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)和冠心病(Coronary heart disease)发病率女性绝经前比男性低,而绝经后基本和男性一致.此现象提示雌激素可能有抗AS的心血管保护作用.另有研究表明选择性雌激素受体调节剂(Seletive estrogen receptor modulators, SERMs)雷洛昔芬(Raloxifene,Ral)具有相似功能.虽然它们都能有效地降低血脂的水平[1],但却不能完全解释其抗AS的作用.血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖、迁移、表型改变和合成分泌大量基质在AS的发生发展中占据重要地位[2]。本实验通过培养VSMC，观察Ral对VSMC增殖的影响，探讨其抗AS的可能机制。 材料和方法 1．1 药物、试剂和仪器 雌性SD大鼠（200克）、Ral、17β-雌二醇(17β-estrpdiol, E2)、血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)、PBS缓冲液、胰酶、含血清含酚红DMEM、无血清无酚红DMEM、24孔培养板、无菌工作台、CO2恒温孵箱、光学显微镜均由中山大学生理教研室提供。 1．2 细胞培养和传代：将大鼠以颈椎脱臼法处死，迅速在无菌条件下开胸，暴露胸主动脉，小心剃除筋膜和附着的脂肪，取出约2cm长胸主动脉，放入PBS缓冲液洗净，在无菌工作台上小心剥去外膜和结缔组织，磨擦破坏内膜，用PBS缓冲液冲洗干净后,把血管中膜剪成约1mm3碎片，用尖嘴吸管将组织块放入培养瓶，均匀铺开使组织块规则排列，待组织块固定后加入10℅含血清含酚红DMEM，倒置培养瓶，放入CO2恒温孵箱，在37℃，95℅O2和5℅CO2条件下培养。约一周后VSMC长满瓶底，加入PBS缓冲液冲洗后倒掉液体,用胰酶消化2-3mins后倒掉液体，再加入两倍量的10℅含血清含酚红DMEM，平分所得液体到原培养瓶和另一培养瓶中，放入CO2恒温孵箱培养。如此连续传代,实验用4-6代细胞. 1.3 种板计数：取生长良好的4-6代细胞,倒去其培养瓶中培养液,然后加入胰酶消化,加入含血清含酚红DMEM,配成每毫升1×105个细胞悬液,每孔1毫升接种于24孔培养板中,细胞贴壁后换无血清无酚红DMEM.24小时后加药处理,在倒置光学显微镜下计数. 1.4 实验分组:(1)空白对照组 (2) AngⅡ处理组 (3) 10-8mol/L Ral+ AngⅡ组 (4) 10-7mol/L Ral+ AngⅡ组 (5) 10-6mol/L Ral+ AngⅡ组 (6) 10-5mol/L Ral+ AngⅡ组 (7) 10-10mol/L E2 + AngⅡ组(8) 10-9mol/L E2 + AngⅡ组 (9) 10-8mol/L E2 + AngⅡ组 (10) 10-7mol/L E2 + AngⅡ组(11) 10-6mol/L E2 + AngⅡ组 1.5 统计学处理：所有数据以x±s表示，用t检验，p〈0.05示有显著性差异，p〈0.01示有极显著性差异。 结果： 2.1 Raloxifene对VSMC细胞计数的影响 从附图一可见,第二组中, 在加入AngⅡ后VSMC的增殖十分活跃,而在Ral和AngⅡ混合用药组,细胞密度有较显著的减小(第3组减小不明显),而且,随着加入Ral的浓度提高,减小越明显.此结果提示, 选择性雌激素受体调节剂Ral对VSMC 增殖有抑制作用, 抑制效果与加入的药物浓度成正相关.