NY_T 1258-2006 饲料中苏丹红染料的测定 高效液相色谱法.docVIP

饲料中苏丹红染料的测定 高效液相色谱法 Determination of sudandyes in feed High-performance liquid chtomatography 2006-12-06 发布 2007-02-01 实施 前 言 本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家饲料质量监督检验中心(北京)。本标准主要起草人：李兰、杨曙明、索德成、闫惠文、刘庆生。 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定饲料中的苏丹红染料，方法定量限为0．05 mg／kg。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及添加剂预混合饲料中苏丹红工、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB／T 14699．1饲料采样3 原理 试样中苏丹红染料经乙腈振荡提取后，氮气吹干浓缩，注入高效液相色谱仪反相色谱系统中进行分离，用紫外检测器和二极管矩阵检4 试剂和溶液 除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB／T 6682规定的一级用水。4．1乙腈：色谱纯。4．2乙腈：分析纯。4．3流动相：溶剂A一乙腈；溶剂B水。4．4苏丹红染料标准品：苏丹红工、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ的纯度均应大于95％。4．5苏丹红染料标准溶液4．5．1苏丹红染料标准贮备液：分别准确称取已知纯度的苏丹红标准品苏丹红工、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ各10 mg，精确至0．0001 g，分别置于100 mL棕色容量瓶中，加乙腈(4．1)超声使之完全溶解，并定容至刻度，摇匀。该溶液中苏丹红工、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ浓度均为100g／mL，于4℃保存可使用3个月。4．5．2苏丹红染料标准中问液：分别准确移取苏丹红工、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ标准贮备液(4．5．1)各5 mL，置于50 mL棕色容量瓶中，用乙腈(4．1)定容至刻度。该溶液中苏丹红染料浓度为10 pg／mL，于49保存可使用1个月。4．53 苏丹红染料标准工作液：准确移取苏丹红染料标准中间液(4．5．2)0．5 mL、1．0 mL、2．5 mL、5．0 mL、100 mL于50 mL棕色容量瓶中，用乙腈(4．1)定容至刻度。此时，溶液中苏丹红染料的浓度分别为0．1_ug／mL、0．2g／mL、0．5g／mL、1．0#g／mL、2．0g／mL，于4℃保存可使用一周。5 仪器和设备 除实验室常用仪器和设备外，还包括：5．1 电子天平：精度为万分之一和千分之一各1台。 1 5．2振荡器。5．3高效液相色谱仪：紫外检测器(多波长)和二极管矩阵检测器。5．4针头过滤器：备孔径为0．45脚有机微孔滤膜。5．5离心机：5000 r／min。5．6氮吹仪：50℃。5．7涡轮混合器：2500 r／in。6 试样的选取和制备6．1按GB／T 14699．1采样。6．2选取有代表性饲料样品至少500 g，四分法缩减至100 g，粉碎，全部通过孔径为0．42 的试验筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存，备用。7 分析步骤7．1试液的制备7．11 提取 称取配合饲料10 g；浓缩饲料、添加剂预混合饲料样品5 g(精确至0．001 g)，置于150 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL的乙腈(4．2)，于振荡器(5．2)振荡提取30 min，离心，上清液备用。7．1．2准确吸取试液(7．1．1)中配合饲料提取液10 mL，氮气吹干，加入2 mL乙腈(4．1)涡轮混合器(5．7)混合30 S，过孔径为0．45脚的有机滤膜，滤液上机测定。7．1．3浓缩饲料、添加剂预混合饲料提取液直接上液相色谱仪测定。7．2色谱条件7．2．1 色谱柱 具有C18填料的柱子(粒度为5m)：柱长250 mm，内径4．6 。7．2．2流动相(4．3) 以1．0 mL／min流速梯度洗脱。梯度条件见表1。 1 洗脱梯度表 (min) 溶剂(A％) 溶剂(B％) O．OO 95 5 8.00 100 0 8.50 100 O 28.0 100 0 29．O 95