NY_T 937-2005 饲料中西马特罗的测定 高效液相色谱法.docVIP

饲料中希马特罗的测定 高效液相色谱法 Determination of cimaterol in feeds High-performance liquid chromatographic 2005-09-21 发布 2005-12-01 实施 前 言 本标准参照国内外文献并经过大量的试验，制定了液相色谱法测定饲料中西马特罗方法。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。 本标准主要起草人：李玉芳、王彤、赵小阳、高生。 饲料中希马特罗的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了用高效液相色谱(HPLC)测定饲料中西马特罗含量的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及复合预混合饲料中西马特罗的测定。最低检测浓度为0．08mg／kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／丁6682—1992 分析实验室用水规格和试验方法 GB／T 14699．1 饲料 采样 3 方法原理 用乙酸钠缓冲溶液提取饲料中的西马特罗，提取液过固相柱净化后，吹干，用流动相溶液溶解，直扫在HPLC仪上测定。 4 试剂和溶液 以下试剂除特别注明者外均为分析纯，水应符合GB／T 6682—1992一级水要求。 4．1 氨水。 4．2 乙酸。 4．3 三水合乙酸钠。 4．4 磷酸二氢钠。 4．5 甲醇：色谱纯。 4．6 提取溶液：称取31．63g三水合乙酸钠(4．3)溶于水，加入34．00mL乙酸稀释至1L，(pH=4．8)。4．7 乙酸溶液：c(CH3CLX)H)=1mol／L取16．7mL25％乙酸(4．2)于100mL容量瓶，用水定容至刻度，摇匀。 4．8 乙酸乙酯洗脱液：取3．5mL氨水(4．1)于100mL容量瓶中，用乙酸乙酯(优级纯)稀释至刻度，葬匀。 4．9 盐酸溶液：，(HCl)=0．02mol／L。 4．10 HPLC流动相：称取3．91g磷酸二氢钠，用去离子水溶解，稀释至1L。该溶液与乙腈(色谱纯)按100+5(V+V)混合，过膜，用前超声脱气5min。 4．11 两马特罗标准贮备液：精确称取10．00mg西马特罗标准品(纯度为95％)精确0．00001g，于100mL容量瓶中，加盐酸溶液(4．9)溶解，用水定容，该贮备液每毫升含西马特罗为100μg／mL。 4．12 西马特罗中间溶液：移取西马特罗贮备液500μL于50mL容量瓶中，用水稀释并定容到，该中作溶液每毫升含西马特罗为1．00μg／mL。 4．13 西马特罗标准工作液：移取西马特罗中间溶液400μL用流动相溶液4．10稀释至10mL，该标准工作液每毫升含西马特罗为40ng／mL。 5仪器和设备 5．1 实验室常用仪器设备。 5，2 分析天平：感量0．0001g和感量0．00001g。 5．3 超声水浴。 5．4 振荡器：水平或往复转动，频率250r／min一300r／min。 5．5 真空泵。 5．6 氮气。 5．7 Oasis R MCX固相萃取柱①：填料30mg，体积30mL。 5。8 高效液相色谱仪： 具有合适的C18柱，UV检测器或二极管阵列检测器。 6试样的制备 按GB／T 14699．1采取实验室样品(用四分法缩减分取200g)粉碎使之全部通过0．45mm孔径筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 7 试样溶液的制备 7．1 提取 称取配合饲料试样约3g，或添加剂预混料试样约L5g试样，精确至0．0001g，置于250mL三角瓶中，准确加入提取溶液(4．5)150mL，振摇使全部润湿，盖紧塞子，放在旋转振荡器(5．4)上，振荡20min，取下，溶液通过定性滤纸过滤，收集约30mL备用。 7．2 净化 精确吸取2mL提取液(7．1)置于固相萃取柱小柱上(5．7)，用注射器加压过柱(或用其他装置)，但过柱速度不超过2mL／min，再分别取2mL乙酸(4．7)和2mL甲醇(4．5)淋洗固相萃取柱小柱，丢弃所有的流出液，最后取2mL乙酸乙脂洗脱液(4．8)洗脱，将洗脱液置于40℃的条件下，用氮气吹干，加入0．50mL一1．00mL流动相溶液溶解残渣，必要时可过0．45μm滤膜，收集清液用于高效液相色谱仪分析。 7．3 色谱条件