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家蚕基质金属蛋白酶基因的克隆与表达分析 中文摘要 家蚕基质金属蛋白酶基因的克隆与表达分析 中文摘要 基质金属蛋白酶(matrix mori基质金属蛋 能够降解基底膜和细胞外基质中大部分蛋白质。研究家蚕Bomby-x 白酶基因，不仅对研究家蚕变态发育的生理调节具有重要的理论意义，而且可望 通过对家蚕模式昆虫的研究，从更深层次阐明MMPs家族的基因功能及作用机制。 为了研究脚s在家蚕生理代谢过程中的作用，本论文的研究工作主要分为以下 几部分： 1．家蚕基质金属蛋白酶基因的克隆及序列分析：利用cDNA末端快速扩增 257 bp， 包含一个l686 kD； bp的开放阅读框，编码561个氨基酸，蛋白质分子量约为62．3 Bm-MMP．V2 188 617 eDNA序列全长为2bp，包含一个1 bp的开放阅读框，编码 538个氨基酸，蛋白质分子量约为59．9kD。基因结构分析显示，Bm-MMP具有13 个外显子，选择性剪切位点在第12外显子上。Bm-MMP-V2的编码区序列比 Bm-MMP．V1的编码区序列缺少69个核苷酸，其余核苷酸序列相似性为100％。氨 基酸序列分析显示，Bm．MMP具有基质金属蛋白酶家族的典型结构特征：信号肽 序列、前肽区、催化区、铰链区及血红素蛋白类似区，其中催化区存在一个保守 序列，为催化活性中心。 与蜡螟Galleria 与黑腹果蝇Drosophila 61．2％和64．3％。 2．原核表达：将砌．^办织阳的编码区克隆到表达载体pET28a(+1，并在大肠 标签，大小约为62kD的融合蛋白成功表达。 家蚕基质金属蛋白酶基因的克隆与表达分析 中文摘要 3．Bm—MMP基因在家蚕中不同发育时期及免疫刺激的表达特征：半定量 36h及48h、预蛹中的表达量比5龄中食期与化蛹后的表达量高，推测该基因与 家蚕幼虫蜕皮变态有关；脂多糖(LPS，细菌细胞壁成分)诱导5龄3d的幼虫， 疫相关。 本研究首次在家蚕中克隆了家蚕基质金属蛋白酶(Bm．MMP)基因全长cDNA 序列，分析了其序列的结构特征，并研究了该基因在大肠杆菌中的原核表达，推 测Bm—MMP具有蛋白水解酶活性。通过对Bm．MMP在不同发育时期及免疫刺激 后的表达特征研究，推测该基因可能与家蚕变态发育及免疫刺激有关，这不仅对 研究家蚕变态发育机理具有重要的理论意义，也为研究昆虫变态发育的生理代谢 过程提供了一个参考。 关键词：家蚕；基质金属蛋白酶；原核表达；半定量RT-PCR 作 者：管京敏 指导教师：沈卫德 n and ofamatrix inthe mori gene silkworm，Bombyx Cloningexpression metalloproteinase 量堕堕鲫 ‘ ● _ o ‘ 一一 一 and 0Iamatrix