病毒吸附对宿主细胞膜影响及中药干预作用.pdf

中文撮饔 中文摘要 痫毒性疾病的危害已威胁到人类生存，裰2006年3月由国际医学科学院组织召开 静第二藩全球大会主，5∞名专家据蠢：不装变化豹瘸海菠全溶娃子大流行懿危险之中。 WHO等单位联合发布的《发展中国塞疾病控制优先项目》中指出：人类卫生面临的四 大挑战，其中第三项为新发痫海性疾瘸的大流行。 随着分子生物学理论和技术在病毒学研究中的应用，尽管现代医学对病毒感染机制 的认识有了飞越性的发展，但控制手段始终没有突破性进展，寻找有效的控制病毒性疾 痣夔手段已成为2l毽纪太类兹重要事件。 中医药防治病毒性疾病有数千年的经验和完整的理论体系，是中医药治病的优势领 域。醣其疗效确切、栩对广谱、低毒静特点已被整入掰接受，医学界精待麸中医药中发 现控制病毒蛙疾病的荫效药物。近20年来，虽然大蹩的试骏证实了中药治疗痫毒性疾 病的有效，尤其是sARs以后国内外从中药中寻找有效的抗痫毒成分成为热点，但直垒 强蕊摭薅毒中药豹磅裁并没骞突酸性邀震。其漩因④缺乏充分棒现中医药治疗病毒性疾 病特点的研究思路；②缺乏充分体现中医药治疗病毒性疾病特点的研究手段。因此，在 中医蓊治疗瘸毒性疾瘸逢论豹指导下，应弱蕊代生物学技术黧手段礤究中莼豫疗病毒性 疾病的机理，对中药逡向世界具有重臻的现实意义。 本研究在原有抗病毒药效试验和抗病毒作用机理研究的旗础上，从病毒吸附环节的 一些非特冥性痍理生蠼环节入手，以2～3辨病毒株为样本，进一步探讨病毒吸附细胞 的生物学机制和中药桅子提取物z0和半枝溅总黄酮对此环节的干预作用，为寻找中药 抗病毒俸瘸静囊正辍点羹定綦疆。本论文静磷究鑫容为国家蠡然秘学蘧金瑟土颈銎资魏 课题的部分内容。 一、搅子提取物zG及半技蕊总黄酮的体外抗病毒作用研究 以Hep_2细胞株作为宿主细胞，以阿昔洛书作为抗单纯疱疹病毒l型的阳性对照药， e魏et 采爱数缀貔疯变法(eyt。pa隧eCpE)慕鼹察挺手提取甥ZG和半技莲憨黄酮对4 1 病毒吸附埘宿主细胞膜的影响及·扣曲的干预作埘 zG列Hep-2细胞的Tco和Tc50分别为5mg·mL。和12．74 mg·mL一；半枝莲总黄酮对 Hep一2细胞的Tco和TC50分别为3．13mg·mL。和8．91mg·mL～：阿昔洛韦的Tco和Tc50 总黄酮对呼吸道合胞病毒(RSV)有明显的抑制作用；两者对柯萨奇B族病毒4型(coxB4) ·mL～，TI为13．10。阳性对照药阿昔洛韦对PIV_l的Ic50和T1分别为0．05 mg·mL。 和】9．05。 二、病毒吸附对宿主细胞膜电位的变化及中药的干预作用 运用细胞膜电位特异性荧光探针DiBAc4(3)标记Hep一2细胞膜电位，以流式细胞仪 变化情况；并以氯化乙酰胆碱为阳性对照，探讨中药栀子提取物zG和半枝莲总黄酮对 此过程的干预作用，为研究病毒吸附宿主细胞的生物学机制及中药对此环节的干预作用 提供理论依据。结果显示：正常Hep．2细胞膜电位荧光值在静息状态下基本稳定在65 内，膜电位下降，处于超级化状态；2种中药均分别以3种加药方式作用后，对Hsv-1 和PIV_1吸附过程中Hep．2细胞膜电位的超极化状态均没有明显影响。结论：病毒吸附 宿主细胞过程中使膜电位持续下降，处于超极化状态，从而有利于病毒的内化，可能为 病毒感染的生物学机制之一。乙酰胆碱对病毒吸附过程中膜电位的下降有明显改善的作 用，而栀子提取物zG和半枝莲总黄酮对此无明显干预作用，说明中药抗病毒机理可能 与此环节无关。 三、病毒吸附对宿主细胞膜Na+．K+．ATP酶活性的影响及中药的干预作用 酶活性的变化，以探讨病毒吸附环节的生物学机制。同时设肝素钠为阳性对照药，观察 中药栀子提取物ZG和半枝莲总黄酮在三种不同加药方式作用后，对HsV．1和PIv_1吸 2 ”文摘要 胞过程中，细胞膜Na+一K+一ATP酶活性均显著增加，与正常细胞组比较有显著性差异； Nr—K+一ATP酶活