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Lonza NucleofectorTM 技术在糖尿病研究中的应用 摘要：现阶段糖尿病的研究主要采用细胞作为研究模型，希望能够从分子层面研 究糖尿病的形成、发病、遗传机制，争取能够通过分子手段治疗糖尿病，尤其是 治疗具有家族遗传性的糖尿病。在以细胞为模型的糖尿病研究中，基因有限公司 代理的Lonza 核转染系统发挥了非常关键的作用，有效地提高了细胞的转染效率， 保证了实验的顺利开展，为许多科学家发表高水平研究论文奠定了坚实的实验基 础。 糖尿病是一种因体内胰岛素绝对或相对不足所导致的一系列临床综合症，与 遗传基因有着非常密切的联系。糖尿病的主要临床表现为多食、多饮、多尿和体 重下降（“三多一少”），以及高血糖、尿糖等。 世界卫生组织将糖尿病分为四种类型：Ⅰ糖尿病、Ⅱ型糖尿病、妊娠期糖尿 病和其他类型糖尿病。不同类型的糖尿病都会导致胰岛β细胞不能产生足量的胰 岛素或机体不能够有效利用胰岛素，用以降低血糖的浓度，从而导致高血糖的发 生。Ⅰ糖尿病也称胰岛素依赖型糖尿病，是由于自身免疫系统破坏胰岛β细胞导 致的，是一种先天家族性遗传病；Ⅱ型糖尿病也叫做非胰岛素依赖型糖尿病，是 由于机体组织、细胞的胰岛素抵抗，胰岛β细胞功能衰退等原因引起的；妊娠期 糖尿病是由于妊娠期分泌的激素使机体产生胰岛素抵抗引起的，分娩后治愈。遗 传性胰岛素抗拒、胰脏疾病、荷尔蒙失调等也会导致糖尿病。 糖尿病是对人类健康威胁最为严重的疾病之一，一直以来都是科学家们研究 的重点。目前，Ⅰ糖尿病、Ⅱ型糖尿病尚不能完全治愈，所以现阶段的科学研究 都是围绕这两类糖尿病而展开。 现阶段，糖尿病的研究模型主要有糖尿病鼠活体模型和细胞模型。细胞模型 主要是从分子层面研究糖尿病的形成、发病、遗传机制，争取能够通过分子手段 治疗糖尿病，尤其是治疗具有家族遗传性的糖尿病。在现代医学和生物学研究中， 常用于糖尿病研究的细胞有THP-1，鼠原代CD4+T 细胞、原代主动脉内皮细胞、 小鼠胰岛瘤细胞系（MIN6 ）、Hela 细胞、冠状动脉平滑肌细胞（CASMCs ）、HL60 、 人视网膜色素上皮细胞系（ARPE-19 ）、人PBMCs 细胞、RBL-2H3 等细胞。在 以细胞为模型的研究当中，科研人员需要将感兴趣的外源物质（质粒DNA 、siRNA 等）高效地转入细胞中，已达到对目的基因进行干扰的目的；但上述提到的这些 常用细胞都是非常难转染的细胞，利用常规的转染方法很难将外源基因高效地转 入细胞中，所以选择一个合适的细胞转染方法对实验的顺利开展就显得至关重要 了。在之前的糖尿病研究当中，为了能够对细胞进行高效率的转染，很多科学家 都选择了Lonza 核转染技术作为细胞转染的方法和手段，实现了细胞的高效转染， 并取得了满意的实验结果。 Marina Cardellini[1]等以冠状动脉平滑肌细胞（CASMCs ）为模型，利用Lonza 核转染等技术，研究了Ⅱ型糖尿病患者的动脉粥样硬化斑块忠 SirT1 对 TIMP3 的表达调控作用。实验结果显示在CASMCs 中，抑制SirT1 的活性会下调TIMP3 的表达，同时SirT1 的过表达会上调TIMP3 的表达。 Serve Olieslagers[2]等想研究TGF- β1 信号通路怎样调节单核细胞的迁移能 力，糖尿病心血管病危险因子是否会影响单核细胞的迁移能力。他们以人单核细 胞为模型，利用siRNA 基因敲除技术（Lonza 核转染系统），对SMAD2 和SMAD3 进行敲除，电转染后细胞成活率90% 。实验结果显示，SMAD2 和SMAD3 不会 对TGF- β1 介导的单核细胞迁移能力产生影响。 + Suseela Srinivasan[3]等以小鼠原代CD4 T 细胞为模型，利用Lonza 核转染 （siRNA ）等技术，研究S1P 能否通过调节HIF1α I.1 和CD69 的表达从而降低I + 型糖尿病人CD4 T 细胞的活性，进而发掘S1P 降低I 糖尿病人并发炎症的治疗 潜能。实验结果显示 S1P 能够显著性的上调HIF1αI.1 ，从而使IFN-和CD69 的 + 表达下调，进行降低 I 型糖尿病人CD4 T 细胞的活性，具有一定的潜在治疗能 力。 Peroxisome proliferator-activated re