以Ⅳ型胶原酶为靶点单抗导向药物抗肿瘤作用以及建立Ⅳ型胶原酶抑制剂筛选模型研究.pdfVIP

!璺垫塑垩墨查堂堕主望兰 一一—!!!!!里 以lv型胶原酶为靶点的单抗导向药物的抗肿瘤作用以及 建立Iv型胶原酶抑制剂筛选模型的研究 中文摘要 f近几年来，基质金属蛋白酶因在肿瘤的生长、转移和血管生成等多个环节中发 挥着重要作用而成为肿瘤治疗研究中引人注目的新靶点。研究表明，MMPs的组织 特异性抑制剂TIMPs或合成的小分子MMP抑制剂(MMPIs)可以抑制肿瘤的生长和 转移。lv型胶原酶作为MMPs家族中的重要成员之一，可以通过降解IV型胶原等胶 原底物破坏基底膜和细胞外基质的完整性，从而有利于肿瘤的生长、转移和血管生 成。一般来说，在肿瘤细胞及其邻近的问质组织中，IV型胶原酶的表达和活化显著 增加，并且这种增加与肿瘤的恶性表型呈正相关。以其为分子靶点，发展的多种小 分子Iv型胶原酶抑制剂在恶性肿瘤的治疗中显示出确切的疗效，部分化台物进入了 临床研究阶段。我室制备的小鼠抗Iv型胶原酶单抗3D6可以与Iv型胶原酶特异性结 合并中和该酶的活性，以其为基础构建的单抗导向药物在小鼠实验肿瘤模型中显示 出很好的疗效J本研究进一步构建了单抗3D6及其小型化片段与高效抗肿瘤抗生素 力达霉素的免疫偶联物，并对其体内外抗肿瘤往盟进行了研究。另外，我_fiJN用单 抗3D6与Iv型胶原酶的结合特性，以竞争性抑制为基础，建立了Iv型胶原酶抑制剂 的箍垂』§l塾并利用该模型进行卫Y型照愿酸翅盔4剞的筛选。研究内容主要包括以 下几个部分。 一、抗Ⅳ型胶原酶单抗3D6与力达霉索偶联物的制备及其抗肿瘤作用 f单抗3D6可以与Iv型胶原酶特异性结合，以其为载体与抗肿瘤抗生素平阳霉素 构建的偶联物在肿瘤生长和转移的动物实验模型中显示出比游离药物更好的治疗作 用，以SPDP作为偶联剂制各的3D6-LDM偶联物对小鼠移植性肝癌(／-／22)的初步研 究亦显示出一定的疗效。最近，放射免疫偶联物Zevalin获得FDA的批准上市，给鼠 源性单抗j!fjr肿瘤治疗带来了希望。我”J以巯基引入试剂2．IT}II异型双功能偶联剂 MBS作为交联荆，制各了以1：1分子比的偶联产物为主的单抗3D6与高效抗肿瘤抗 生素力达霉素的偶联物，该偶联物保留了单抗3D6与Iv型胶原酶和Iv型胶原酶表达 较高的H22肿瘤细胞的结合能力，井在体fiIMTT实验中显示出比游离力达霉素更强 的细胞毒作用。采用体外细胞毒性实验中与游离力达霉素作用相当的剂鬣，在第1 中田协和医科大学饵士论文 中文摘要 天和第8天静脉给药两次，观察偶联物对小鼠移植性肝癌H22的抑制作用。结果， 3D6．LDM偶联物0．05 0．05 mg／kg剂量与游离LDMmg／kg剂量组相比肿 mg／kg和0．10 瘤生长抑制作用显著增强。按瘤体积计算，实验第14天，上述两个剂量的偶联物肿 6％和95．9％，显著(PO．05和P(0．01)高于游离LDM(70．o％)， 瘤抑制率分别为86 而偶联物0，025 8％。实验期间，3D6一LDM偶联物治疗 m眺硎量的肿瘤抑制率为75 组动物的肿瘤生长显著延迟。至第21天，力达霉素组动物开始死亡(剩9只)，肿瘤 VS．LDM)， 抑制率降低为54．9％．而偶联物三个剂量组的抑瘤率分别为60．1％(PO．05 87．8％和97．9％(Po．01VS．LDM)。进～步提高LDM、3D6与LDM的混合物及 3D6．LDM偶联物的给药剂量，单次给药，观察动物的耐受情况，结果动物对偶联物 的耐受剂量较对游离力达霉素和混合物的耐受剂量显著提高，显示偶联物可能通过 在动物体内的肿瘤特异性定位提高了肿瘤部位的药物浓度，从而与游离药物相比疗 效显著增强并且全身毒性降低，混合物因不具备这一机制而不能提高动物对其的耐 受剂量。由此得出结论，单抗3D6-LDM偶联物除了具有3D6和LDM各自的效应功能 外，还可通过抗体的靶向作用表现出比同等剂量游离LDM更强的抗肿瘤作用和较低 的毒性。卜／