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ChinJBiotech
生物工程学报 2009，March25；25(3)：381-387
ChineseJournalof ISSN1000-3061
journals．im．ac．cn Biotechnology
o of
2009Institute reserved
cjb@im．ac．cn Microbiology,CASCSM,Allrights
二步法黑曲霉脂肪酶基因砌A的全基因合成及其在毕赤
酵母中的高效表达
杨江科，严翔翔，张正平，江雪青，闫云君
华中科技大学生命科学与技术学院分子生物物理教育部重点实验室，武汉430074
摘要：黑曲霉脂肪酶是重要的工业用酶，在食品、制药等领域具有广泛的用途．获得黑曲霉脂肪酶高效表达的基因工
程茵是该脂肪酶规模化应用的前提．通过全基因合成对目的基因进行分子改造和人工组建是实现基因高效表达和体外
分子进化的有效手段。本研究主要针对一步法长片段基因合成中复杂结构的非特异性配对和过多的PCR引入碱基错配
对lipA基因密码子及RNA二级结构进行优化并引入C／a
I和PstI限制性酶切位点连接成完整的全长
基因的各片段F1(237 bp)；通过该基因内的Cla
bp)、F2(238bp)和F3(422
坳A基因．本方法有效地降低了长片段合成过程中寡核苷酸片段的非特异性配对、复杂的二级结构以及碱基突变对DNA
的高效表达，并为产酶参数的优化和酶的规模化制备奠定了基础．
关键词：黑曲霉脂肪酶基因lipA，全基因合成，二步法，毕赤酵母，高效表达
ofthefull
Two—-stepsynthesis lengthAspergillusnigerlipase
leadsto inPichia
genelipA high-levelexpressionpastoris
Yan
JiangkeYang，XiangxiangYan，ZhengpingZhang，XueqingJiang，andYunjun
and
UniversityofScience 430074。Ch／na
KeyLaboratoryofMolecularBio-physic$ofMinistryofEducation，Huazhong Technology，Wuhan
are usedinindustriesforfood and
Abstract：Aspergillusnigerlipasesimportantbiocatalysiswidely processingpharmaceuficM
recombinantscallleadtocosteffective scale is
production．Fulllengthsynthesis
pre
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