绿激光前列腺汽化(PVP)治疗前列腺癌导致的下尿路梗阻降低前列腺癌播散危险性的临床研究.DOCVIP

临床医学论文-绿激光前列腺汽化(PVP)治疗前列腺癌导致的下尿路梗阻降低前列腺癌播散危险性的临床研究 【摘要】? 目的 验证绿激光前列腺汽化(PVP)可以降低治疗前列腺癌导致的下尿路梗阻过程中前列腺癌细胞播散入血液循环的危险性。方法 4例前列腺癌患者和22例良性前列腺增生患者，因患有下尿路梗阻接受PVP治疗，分别于术前和术后取静脉血，用反转录PCR技术探测患者血液中的前列腺特异抗原(PSA)mRNA，以间接探测术后血液中是否有来自前列腺的上皮细胞。结果 PVP治疗前列腺癌导致的下尿路梗阻过程中由于前列腺血管得到较好封闭，没有前列腺上皮细胞进入血液循环。结论 应用PVP治疗前列腺癌不会导致前列腺癌细胞进入血液循环。 【关键词】? 激光治疗 　　前列腺癌是西方国家最常见的男性肿瘤之一[1]。在我国目前已经上升至男性泌尿生殖系统肿瘤发病率的第三位[2]。前列腺癌或良性前列腺增生(Benign Prostatic Hyperplasia, BPH)导致的下尿路梗阻通常是应用经尿道前列腺电切术(Transurethral Resection of the Prostate, TURP)来完成的。但TURP可能会导致前列腺上皮细胞进入血液循环中，从而潜在地增加了术后发生转移的危险性[34]。绿激光前列腺汽化(Photoselective Vaporization of the Prostate, PVP)技术是一种新的高能量KTP激光，新近被用来治疗良性前列腺增生导致的下尿路梗阻。为了解是否在绿激光前列腺汽化过程中可以降低前列腺上皮细胞进入血液循环的危险性，本研究应用了反转录多聚酶链反应(RTPCR)来探测良性前列腺增生和前列腺癌患者接受绿激光前列腺汽化前后的血液标本中前列腺特异抗原(Prostate Specific Antigen, PSA)的mRNA，从而了解是否有前列腺上皮细胞进入血液循环。 　　1? 材料与方法 　　1.1? 组织培养? LNCaP系人类前列腺癌的细胞系。LNCaP细胞培养用前期描述的技术进行[5]。LNCaP细胞及自LNCaP细胞中提取的RNA在本研究中被作为阳性对照。 　　1.2? 患者、绿激光前列腺汽化和血液标本? 本研究为与英国伦敦大学国王学院医院泌尿外科协作课题，得到了英国伦敦大学国王学院医院道德委员会的批准并被准许在中国发表相关资料。患者为在英国伦敦大学国王学院医院泌尿外科2003年2月至8月接受治疗的临床确诊前列腺癌患者4名和BPH患者22名。同时有一位年轻的健康志愿者。患者年龄平均为44-83(65.2±8.1)岁。年轻志愿者为37岁。在术前和手术结束后5min抽取5mL患者静脉血，测定PSA值。所有的PVP都是通过F22.5持续冲洗膀胱镜进行，并用医用蒸馏水冲洗。 　　1.3? RNA提取? 存放在细胞准备管(Vacutainers, Becton Dickinson, 牛津, 英国)中的血液标本在室温3100r/min的条件下离心20min。单核细胞用冰的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗过。将3个LNCaP细胞直接加入到健康志愿者的血液标本中(最终浓度为1 × 106个单核细胞中1个LNCaP细胞)作为阳性对照。按说明在这些单核细胞中加入800μL的TRIzoL 试剂(Invitrogen，英国)。提取的总RNA溶解于19μL无RNA酶的水中并加入1μL的RNA酶抑制剂(Invitrogen，英国)。 　　1.4? RTPCR? ①去除DNA污染程序：为了去除DNA污染，总RNA用DNA酶(DNase Ⅰ, 1 unit/μL，Invitrogen, 英国)处理。在这一过程中，10μg总RNA，2μL DNA酶反应缓冲液 (×10), 2μL DNase Ⅰ，然后加无RNA酶水至总量20μL。标本在室温下保存15min，然后加入EDTA(乙二胺四乙酸25mmol/L)1μL并在65℃加热10min。②反转录程序：反转录PCR扩增包括5μg DNA酶处理过的总RNA，反转录PCR缓冲液(Invitrogen，英国)，1μLSuperscript Ⅱ 反转录酶(200units/μL)，2μL二硫苏糖醇(0.1mol/L, Invitrogen，英国)和1μL Oligo (dT)1218引物(500ng/μL Invitrogen，英国)在20μL反应体积中。标本在42℃孵育50min然后加热至75℃ 15min终止转录酶的作用。③引物序列：PSA引物的序列如下：第一个PSA顺向引物在外显子3(5′GATGACTCCAGCCACGACCT3′)，逆向引物在外显子5(5′ CACAGACACCCCATCCTATC3′) [6]。 　　第二个PSA顺向引物在外显子2(5′TTGTGGC