大豆叶绿体转化载体pJY系列构建及其转化研究.pdf

磺士论文：大豆§}绿律转纯载髂姆系列静秘建及其转纯研究 摘 要 杂交大甄是我闺具秘主知识产衩的科研成莱，其有广阔的应掰前景。为解决 杂交大豆翎种过程中不裔系荔与保持系灞杂的阏题，我们开展了大豆叶绿体转基 因的研究，目的愚通过转基因的方法在不育系的细胞质中，植入筛选标记熬因， 以区分不育系和保持系。 获得两段大厦叶绿体同源重组序列LHRR和RHRR，克隆到质粮pUCl9中，并 将来源于质粒pTFl02的壮观艨素抗性基因aadA克隆到两段同源重组序列之间 撼因3’序列，分别从烟草叶绿体基因组中扩增而来。在此基础上，我们还将草 丁膦抗性基因和绿色荧光蛋白与GUS的融合鬣自基因分别克隆剐该裁体上，得 到pJY03和pJY04，并初步应用于烟草的叶绿体转化，获得了具壮观霉素抗性的 绿色愈伤和幼苗，PCR检测出aadA基因的条带，并谯激光共聚焦扫描下检测到 GFP的表达，由此证实了这一实验思路的可行性，为后期大豆时绿体转化工作的 顺利进行打‘F了良好的基础。 关犍谗l大露；睁绿体转纯；表达鼓髂；GFP 2 硕士论文：大豆叶绿体转化载体ply蒜列的构建及熊转化研究 Abstract is of onethemost scientificachievementsthat Hybridso如ean significant Chinesescientistsare theintellectual theinvention holding property．While impmved the toeliminatethemaintain—fineseedsfromthe soybeanyieldgreatly,the difficulty male sterilelineseedsisoftena the ofthe cytoplasmic problem limitingapplication new solvethe initiatedtheresearch．Theofthe technology．Toproblem，we purpose researchistoinsertaselectablemarkerintothe of gene themalesterile cytoplasm line transformation throughchloroplast Basedonthe published soybeanchloroplastgenome of were X07675)，tWO to two pairsprimerssynthesized amplify ad