益气活血中药对心衰心室重构Ⅰ型胶原启动子活性调控研究.pdf

中文摘要 中文摘要 慢性心衰是当今世界上最严重的疾病之～，作为临床多种心血管疾病的终末期 表现。因其死亡率高，治疗棘手，而成为现代临床医学重点研究的难题。对心衰的 防治一直是心血管领域中基础医学与临床医学研究的主要课题之一。 20世纪90年代以后，逐渐明确了以神经内分泌一细胞因子激活，尤其是肾索 一血管紧张素系统的激活所导致的心室重构是心衰发生发展的基本机制。正常心脏 组织主要由心肌细胞、心肌成纤维细胞等实质细胞和I、ⅡI型胶原等间质成分组成。 间质成分中，I胶原占80％，III型胶原占15％。心肌损伤时，心肌细胞肥大、凋 亡，代之以心肌成纤维细胞大量增殖，I型胶原分泌增加，I／III型胶原比例失调 是心衰心室重构的结构基础。I胶原是细胞外间质的主要成分，在心肌中主要由心 肌成纤维细胞合成和分泌．I胶原分子由三条肽链组成，两条ql(I)链和一条a2 (I)链，这两种肽链由各自不同的基因编码，且严格按2：l的比例合成。三条 肽链相互缠绕形成胶原蛋白分子特有的三螺旋杆状结构。因此，我们可以al(I) 链为代表来研究I型胶原的情况。 AngII是肾素一血管紧张素系统(RAS)的主要代表之一，在心衰心室重构中 起着重要作用。国内外研究均已证实，AngII在体和离体都可引起心肌成纤维细胞 增殖，促进其分泌I型胶原，明显增强I型胶原mRNA的表达。但对I型胶原基 因在表达之前被AngII激活的机制研究，尤其是在心肌成纤维细胞中的机制研究， II是 国内则尚无报道。在基因被激活之前，启动予的澈活是关键。所以，研究Ang 如何激活I型胶原基因的表达，就是研究AngII对I型胶原启动子活性的调控作 用。 中医学虽有“心衰”的病名，但与现代医学意义上的心衰并不完全一致。有关 心衰的论述散见于“心痹”、“心悸”、“怔忡”、“喘证”、“水肿”、“心水” 等范畴。经过长期的临床实践，中医药在防治心衰方面取得了一定的进展。对心衰 病因病机的认识，目前已基本趋于一致，认为主要与心气(阳)虚、血瘀和水停有 关。在治疗上多采用益气活血，温阳利水之法。其中，对益气活血中药黄芪、丹参 和川芎嗪等的研究表明，它们具有明确的改善心衰心室重构的作用。 本课题利用基因重组、细胞基因转染、报告基因测活等技术，进行AngII调控心 肌成纤维细胞转染的I型胶原启动予活性作用的研究，并在此基础上，观察具有改善 心功能的益气活血中药成分黄芪甲苷、丹参酮1IA和川芎嗪，对心肌成纤维细胞增殖、 I型胶原含量和mRNA表达的影响及对I型胶原启动予的调控作用。希望能从细胞 水平、基因转录水平认识心室重构的病理机制，并为中医药延缓或阻滞心室重构，防 治心衰提供实验依据。 本论文实验共分为七个部分，具体实验方法及结果如下： 益气活血中药对心衰心皇重构I型胶原启动子活性调控的研究 II对其增殖的影响 1．心肌成纤维细胞的培养鉴定及Ang 利用-tl,肌细胞、成纤维细胞贴壁时间不同，采用反复差速贴壁的方法，提取原代 心肌成纤维细胞，经形态学观察和波形蛋白免疫组化染色，鉴定为心脏成纤维细胞 殖的影响。结果显示，AngII101可明显促进CFB增殖。 2．丹参酮IIA、川芎嗪、黄芪甲苷对CFB增殖的影响 采用MTT法观察了丹参酮II A、川芎嗪、黄芪甲苷三个中药单体对CFB增殖的影 响，结果显示，三个中药单体均可直接抑制CFB的增殖。 3．丹参酮II A、川芎嗪、黄芪甲营对AngII诱导的CFB增殖的影响 10—7mol／1为模型组，观察丹参酮II 取AngII A、川芎嗪、黄芪甲苷对AngII诱导 II诱导的CFB增殖。 苷100、501．tg／ml均可抑制由Ang 4．丹参酮IIA、川芎嗪、黄芪甲菅对AngII诱导的I型胶原含量增加的影响 苷100ug／rra与AngII 诱导的I型胶原含量的影响，并选用Losarta