车前子多糖、黄酮和苯乙醇苷类的纯化、结构解析及其活性功能研究.pdf

摘要 摘要 车前科(Plantaginaceae)车前属(generaPlantago)植物共有约265种，广 布于全世界，是很多地区居民熟知的历史悠久的疗伤草药。 车前子为车前科车前属植物大粒车前PlantagoasiaticaL的干燥成熟种子， 具有药蔬兼用、医食同源之性，被国家卫生部列为可用于保健食品的物品。本 文以江西省吉安产大粒车前子为主要研究对象，在考察车前子有关生物活性的 基础上，应用现代分析分离技术和研究方法，重点对其活性成分多糖类、黄酮 类和苯乙醇昔类进行了提取分离、含量测定、结构表征和体外活性研究，试图 探寻车前子活性成分与其功效之间的关系，为拓展车前子新的食用和医用空间、 合理利用车前子奠定坚实的理论基础。现将本文主要研究结果归纳如下: 1.首先对溶剂法和超临界流体萃取法提取车前子总黄酮的工艺分别进行了 研究。 确立了溶剂法最佳工艺条件为:乙醉浓度60%.固液比1:30、提取温度90C1 提取3次、每次2h。车前子总黄酮的提取率可达2.61%。各提取因素对总黄酮 提取率的影响程度由大到小依次为:乙醇浓度温度提取次数固液比。乙醇浓 度对车前子总黄酮提取率的影响显著 (P0.05)，而温度有一定的影响 (0.05P0.10)，固液比和提取次数在选取的水平范围内对总黄酮提取率影响不 明显. 确立了超临界提取工艺对车前子总黄酮的最佳提取条件为:每克车前子原料 中加入2.5mL无水乙醇作为夹带剂，在温度45C、压力30Wa的条件下提取2 次。超临界提取各因素对总黄酮提取率的影响大小顺序依次为:提取次数》提取 压力夹带剂用量提取温度，提取次数和提取压力对总黄酮提取率具有显著性 影响 (P0.05)，夹带剂用量有一定影响 (0.05P0.10)1温度在选取的水平中 影响不明显。车前子总黄酮的提取率为1.58%，低于溶剂法提取，但杂质含量低。 2.其次，建立了车前子中多糖和苯乙醇昔类的含量测定方法。 建立了以木糖作标准曲线，采用苯酚一硫酸法进行车前子多糖含量测定的方 法。通过对葡萄糖、木糖和车前子多糖分别采用苯酚一硫酸法、葱酮一硫酸法显色 的扫描吸收光谱数据进行分析，发现苯酚硫酸法更适合测定车前子中多糖的含 量，用木糖作标准曲线得出的结果更能准确反映真实的多糖含量值。对苯酚-}i 酸法测定车前子中多糖含量的测定条件优化为:2mL样液先加3%苯酚溶液 摘要 0.5mL,混匀后加浓硫酸4mL,迅速摇匀后，室温放置35min，在480mn处测定其 吸光度。平均回收率为98.9%,RSD=1.79% (nmo)。此方法是一种测定车前子 多搪含量的理想方法，亦可为其他类多糖测定提供依据。 建立了反相高效液相色谱法同时测定车前子中毛蕊花昔和异毛蕊花昔含量 的方法。苯乙醇昔类是车前子主要有效成分，但药典中没有记载其含量的测定 方法.本文采用反相高效液相色谱法在WatersSymmitryCis(5u,m,250mmx4.6mm) 色谱柱上以甲醇:体积分数0.1%甲酸溶液((v40v:60)为流动相，流动相流速为 0.6mL/min,检测波长为330nm，同时测定车前子中毛蕊花昔和异毛蕊花普的含 量。毛蕊花普线性范围为0.2-2.0u,g，线性回归方程为y--2E斗06x+101494，相关 系数r=0.9982。异毛蕊花昔线性范围为0.2--2.即g,线性回归方程为y=2E+06x +8565.1,r=0.9957。样品的平均回收率分别为毛蕊花昔99.7%、异毛蕊花昔101%. 测得大粒车前子中毛蕊花普含量为8.65mg/g，异毛蕊花昔含量为1.36mg/g。该方 法快速简捷，无需对样品进行太多柱前处理，精密度高，重现性好，可为该药 材及制剂的质量控制提供依据。 3再次，对车前子多糖、黄酮和苯乙醇昔组分的分离纯化和结构鉴定进行 了研究。 对车前子多糖提取液的纯化和组分分离进行了研究。先确立了车前子多糖 提取液中有效脱除游离蛋白的方法.将三氟乙酸法、盐酸法、Sevage法、酶解和 Sevage法联用分别应用于脱除车前子多糖提取液中的蛋白，结果表明四种方法对 车前子多糖提取液中蛋白的脱除效果相差不大，而酶解和Sevage法联用在保留较 高蛋白脱除率的同时，能获得最高的多糖得率，故此法较其他方法更适