NS398作用人宫颈癌的差异蛋白质组学研究.pdf

中文摘要 生长的作用机制，为改进宫颈癌的防治方案，改善临床化疗效果提供 新线索。 方法：本研究首先以NS．398、卡铂及两者联合干预人富颈癌Hela 细胞，然后采用MTT比色法检测Ns一398、卡铂及两者联合对宫颈癌 细胞增殖的影响，使用直线回归计算NS一398作用宫颈癌的半数抑制浓 度(IC50)，明确NS．398对宫颈癌细胞增殖抑制作用的影响程度。通过 流式细胞仪PI染色法分析IC50值浓度时NS一398处理的宫颈癌细胞凋 亡率和细胞周期的改变。最后运用二维凝胶电泳法分离NS．398作用宫 颈癌的差异蛋白质，通过质谱分析法(MALDI—TOF)和生物信息学方 法确定其中部分差异蛋白质。 结果：1)NS．398对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有抑制作用。卡 铂对人宫颈癌hela细胞的增殖具有抑制作用。卡铂联合NS．398对人宫 颈癌hela细胞的增殖抑制作用显著增加，其联合抑制率近似于单药抑 制率之和，也近似于两倍卡铂剂量时的增殖抑制率。MTT比色法显示 u hela细胞NS一398的IC50为220．5M．流式细胞仪检测发现，NS一398处 理组较对照组G1期细胞明显增加，而S期细胞明显减少，两组比较有 统计学意义(p0．05)。而卡铂处理组Gl期细胞明显减少，S期细胞明 细胞增殖的抑制作用可能是通过改变细胞周期来实现的。相差显微镜 下观察卡铂干预后细胞呈凋亡改变，提示卡铂对人宫颈癌Hela细胞增 lamol／L 殖的抑制作用可能是通过促进细胞凋亡来实现的。2)200 凋亡指数为3．43士0．02％，对照组凋亡指数为1．48士0．03％。两组比较无 统计学意义(p0．05)。而卡铂处理组凋亡指数为9．32士0．02％，两组比 u 较有统计意义(p0．05)3)提取NS-398(200hD作用48d时组及 对照组Hela细胞总蛋白质进行二维凝胶电泳，经考马斯亮蓝染色，对 NS一398组表达量下调的差异蛋白点为25个，表达量上调蛋白点48个， 只在NS．398组出现的蛋白点12个，NS．398组消失的蛋白点15个。选 取2个表达量下调、14个表达量上调的差异蛋白点进行MOLDI．TOF 质谱鉴定。质谱鉴定获得14张肽质指纹图。经MSDB数据库搜索后其 中10个蛋白点被初步鉴定。本实验通过Mascot软件检索MSDB数据库 和Profound软件检索MSDB数据库初步鉴定的蛋白质点有10个，即3． 磷酸甘油醛脱氢酶(D一3一Phosphoglyceratedehydrogenase)，结蛋白 reductase)，AB029576NID，另外一个 还原酶(probablethiol—specific 为假想的蛋白片段(Hypothetical proteinfragment)． 结论：①选择性COX--2抑制剂NS．398对宫颈癌细胞的增殖具 有抑制作用。②NS一398作用48小时宫颈癌细胞的凋亡诱导率无明显变 TT 化，提示NS．398对宫颈癌细胞的作用可能与凋亡无关，而是通过非凋 亡途径机制抑制Hela细胞增殖。③Ns．398可以增强肿瘤细胞对卡铂的 敏感性。④3一磷酸甘油醛脱氢酶，结蛋白，角蛋白．4，伊默菌素，波形 蛋白，膜联蛋白v，膜联蛋白A3等蛋白表达的上调可能参与了NS．398 对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。 关键词：COX一2抑制剂，NS一398，宫颈癌，蛋白质组学 III Abstract OBJECTS：Totheeffectsandmechanismofaselective investigate COX-·2inhibitorNS--398onthe ofhumancervical proliferation