MALDI质谱分子成像技术——生物标志物发现和药物研发的利器.pdfVIP

维普资讯 维普资讯 切片来获得极薄的组织片，接着用基 存在这种生物分子，然后与做指纹图 羟基苯 甲酸 (DHB)。其中，SA主要 质封闭组织切片并将切片置入质谱仪 谱类似，像做指纹图谱那样，将样品的 适用于高分子量的蛋白；HCCA适用 的靶上。通过计算机屏幕观察样品，利 离子谱图与已知标准品进行对照，分 于多肽和低分子量蛋 白，DHB主要适 用MALDI系统的质谱成像软件，选择 析差异，从而进行生物标志物的发现 用于小分子药物。在 ImagePrep工作 拟成像部分，首先定义图像的尺寸，根 和药物作用的监控。 站，在可控条件下振荡蒸发产生基质 据尺寸大小将图像均分为若干点组成 微粒，然后轻柔的置于组织样品之上。 的二维点阵，来确定激光点轰击的间 MALDl质谱分子成像的技术操 基质溶液在均匀地覆盖于组织切片表 距。激光束通过这个光栅图案照射到 作流程 面的过程中，要尽可能满足以下几个 靶盘上的组织切片，软件控制开始采 MALDI质谱分子成像的技术操作 条件：组织切片上的蛋白无扩散或移 集质谱数据，在质谱仪中，激光束对组 流程具体包括以下4个步骤 (见图2)： 位现象；基质与蛋白形成 良好的共结 织切片进行连续的扫描，组织样品在 1．组织制备 晶；晶体的尺寸必须小于质谱成像的 激光束的激发下释放出的分子被质谱 在组织切片前 ，切除的新鲜组织 分辨率。 仪所鉴定从而获得样品上每个点的质 立即置液氮中冷冻2～3分钟后，在恒温 3．质谱 的获得 荷比 (m／Z)信息，然后将各个点的分 冷冻切片机上进行切割，切割平台的 良好质谱的获得依赖于所使用的 子量信息转化为照片上的像素点。在 温度根据组织类型保持在一5～25℃之 质谱仪，Smartbeam技术则将N2激光 每个点上，所有质谱数据经平均化处 间，如高脂肪含量的组织就要求更低 和YAG激光相结合，可获得较好质量 理获得一幅代表该区域内化合物分布 的温度。切片厚度一般在5-l2m，保 和较高重复性的质谱，空间分辨率为 情况的完整质谱图。仪器逐步采集组 证质谱分析时足够的组分浓度。组织 10 m，可获得200Hz激光频率的谱 织切片的质谱数据，最后得到具有空 切片的优劣是影响图像质量的关键因 图，其XY平面的精度为5m。 间信息的整套组织切片的质谱数据。 素之一。切片制备需要满足以下几个 4．成像数据分析 这样就可以完成对组织样品的 “分子 条件：防止形成冰晶，维持化合物的空 采用软件将选定质量、质量范围 成像”(见图1)。 间排布，避免分析物的移位和降解 避 或重叠在显微图像上的质谱群的强度 设定m／z的范围，即可确定该组 免切片打卷、起皱褶；适宜的切片厚度 分布可视化，分析不同种类生物分子 织区域所含生物分子的种类，并选定 等 。 的空间分布，如多肽、蛋 白或小分子 峰高或者峰面积来代表生物分子的相 2．覆盖基质 等，峰的强度可用色彩饱和度来表示。 对丰度。图像中的彩色斑点代表化合 常用的基质有 3，5一二乙氧基 一4一 有一些专业软件，~Classlmaging可通 物的定位，每个斑点颜色的深浅与激 羟基肉桂酸 (又称芥子酸，SA)、0一【氰 过组织生物标志物的多变量统计分析， 光在每一个点或像素上检测到的信号 基 4一羟基肉桂酸 (HCCA)和2，5．二 自动化分类组织的分子状态。 大小相关。通过增加单位面积上轰击 的激光点数量和像素，研究人员可以 获得更多的样品信息，例如采用4000 像素比200像素能够得到更好的样品 图像。质谱分子成像技术是～种半定 量或相对定量技术，图像上颜色深的 部分表明有更多的生物分子聚集在组 织的这个部分。然而，不可能据此确定 生物分子在组织的不同部位的实际绝 对含量。选择组织图像上的任意～个 斑点，