异补骨脂素结合锌对大鼠成骨细胞生物活性影响的实验研究.pdf

中文摘要 异补骨脂素结合锌对大鼠成骨细胞生物活性影响 的实验研究 摘 要 同的：骨质疏松症是一种多病因的增龄性病变，随着老 龄化社会的到来越来越受到人们的重视。它的基本病理机制 mineral 平衡，骨密度(Bone 的。病因主要与年龄、内分泌紊乱、钙吸收不良以及免疫、 营养等因素有关。 雌激素替代疗法(estrogenreplacement 抑制骨质丢失，是目前临床防治绝经后妇女骨质疏松症 (postmenopausal 可能增加子宫内膜癌及乳腺癌的发病几率。目前人们将寻找 雌激素替代药物的目光放在了植物雌激素上。 实验发现用含有一定浓度补骨脂注射液的DMEM培养 成骨细胞有显著的促增殖作用，能影响骨的合成代谢，具有 防治骨质疏松的作用。异补骨脂素是从补骨脂中提取的香豆 素类化合物，属于植物雌激素的一种。本课题组前期研究的 结果显示异补骨脂素对于促进大鼠成骨细胞增殖和提高碱 性磷酸酶活性有较好的作用。 锌，是维持机体正常生理功能和机体内环境正常生化代 谢所必需的微量元素，也是骨代谢中的重要微量元素之一， 可以有效刺激成骨细胞的骨形成和抑制破骨细胞的骨吸收 中文摘要 作用。有研究显示微量元素锌可维持细胞周期的正常进行． 促进细胞增殖分化；其对成骨细胞增殖及分化的原理可能是 锌通过氨酰基转移核糖核酸合成酶刺激体外成骨细胞的蛋 白质合成，从而促进体外培养大鼠成骨细胞的增殖与分化。 大量研究报道某些药物因素和营养因子可以防治骨质 流失，目前我们对于有效化合物联合应用的了解还比较少。 那么植物雌激素与营养因子结合是否对骨质疏松症有增效 或协同作用呢?这在预防增龄性骨质流失可能有重要意义。 目前已有研究证实大豆异黄酮加钙对绝经后大鼠的骨流失 有预防作用，联合应用金雀异黄素和锌对大鼠股骨组织的骨 成分有协同增效作用。 异补骨脂素和锌结合对骨代谢有加强和／或协同效应的 这种细胞机制尚未见报道，本研究即着眼于测定异补骨脂素 与营养因子锌联合应用对成骨细胞的增殖与分化是否有协 同增效的作用。实验采用体外培养成骨细胞的方法，观察异 补骨脂素和锌对成骨细胞增殖与分化的影响。采用RT-PCR 的技术，检测了异补骨脂素和锌对成骨细胞分泌的蛋白COLI mlLNA，Smad4mRNA，Runx2mRNA，OsterixmRNA表达 的影响。从细胞和分子水平来探讨异补骨脂素及其与锌配伍 的补肾中药防治骨质疏松的机制，以期为提高骨质疏松症的 临床疗效以及抗骨质疏松新药的开发提供实验依据。 方法： 1 h内、)SD大鼠颅骨 采用改良的组织块法分离培养新生(24 0喝mol／L～10母 成骨细胞。将不同浓度的异补骨脂素(1 mol／L)加入到培养成骨细胞 tool／L)与锌(10一mol／L～10。5 的培养基中，用倒置显微镜观察细胞形态和数量的改变。 中文摘要 h， 对照，检测加药后，异补骨脂素和锌及其配伍组24 48 h，72h对大鼠成骨细胞增殖的影响。 3采用对硝基苯二钠基质动力学法(pNPP)法，以雌激素为 h， 阳性对照，检测了异补骨脂素和锌及其配伍组在24 48 h，96 h和72 h对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的 影响。 4采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR，reverse