山东省东平湖四种常见淡水鱼肠道菌群分析.docVIP

山东农业大学硕士专业学位论文 中文摘要 鱼类肠道菌群是肠道的正常组成部分，是肠道微生物与宿主以及所处的水生环境 形成的相互依赖、相互制约的微生态系，对营养物质的消化吸收、免疫反应以及器官 的发育等方面具有其他因素不可替代的作用，并且影响到鱼类的生长、发育、生理和 病理。微生态学研究表明，环境条件的轻微改变可导致机体微生态系统的变化，造成 菌群失调。肠道微生态系统的破坏还可引起内外源性感染，干扰机体营养代谢和免疫 功能甚至严重影响机体健康状态，导致一系列疾病的发生。因此对肠道菌群组成多样 性进行研究具有至关重要的意义。本研究从肠道菌群的多样性的角度，对山东省东平 湖库区四种常见淡水鱼的肠道微生物组成进行深入地了解，为本库区鱼类疾病防治、 鱼类饲料中的微生物类添加剂以及微生态育种提供基本的资料。 本研究选择山东省东平湖库区、体重约 0.5～0.6 kg 无外伤健壮活泼鲤科鱼的 4 个 亚科鱼，即雅罗鱼科的草鱼、鲢亚科的鲢鱼、鲤亚科的鲤鱼和鲫鱼，用于试验，每种 鱼随机各取 10 条，取这四种淡水鱼肠道内容物，每种鱼的肠道内容物混合在一起代表 一种鱼肠道内微生物菌群组成。每种鱼取两份样品，一份用于鱼肠道菌群中的需氧菌 或兼性厌氧菌分离，生化鉴定，从而对每种鱼肠道中的菌群数量和种类组成进行分析， 确定这四种淡水鱼肠道内的优势菌群；另一份用于肠道菌群 DNA 的直接提取，采用 ERIC-PCR (enterobacterial repetitive intergenic consensus polymerase chain reaction, ERIC-PCR)技术，获得鱼肠道菌群的 ERIC-PCR 指纹图谱，并用 NTSYS-pc (Version 2.10) 软件进行分析，从而进一步对每种鱼肠道中菌群组成进行分析。 结果显示：草鱼肠道微生物菌群主要有哈夫尼亚菌属、致病杆菌属、气单胞菌属、 柠檬酸菌属、拉恩氏菌属、芽孢杆菌属、链球菌属和葡萄球菌属八种，其中哈夫尼亚 菌属、链球菌属和葡萄球菌属量最高，达107cfu/g数量级，其他的均在106cfu/g数量级。 鲢鱼肠道中微生物菌群有哈夫尼亚菌属、致病杆菌属、气单胞菌属、柠檬酸菌属、假 单胞菌属、拉恩氏菌属、芽孢杆菌属和链球菌属，其中气单胞菌属量最高，可达107cfu/g 数量级，其他的均在106cfu/g数量级。鲤鱼肠道微生物菌群主要有哈夫尼亚菌属、致 病杆菌属、气单胞菌属、柠檬酸菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属和链球菌属七种，其 中这七种菌群间的数量差别不大，都在105～106cfu/g数量级。鲫鱼肠道微生物菌群主 要有八种，分别为哈夫尼亚菌属、致病杆菌属、气单胞菌属、柠檬酸菌属、假单胞杆   1 山东省东平湖四种常见淡水鱼肠道菌群分析 菌属、芽孢杆菌属、链球菌属和葡萄球菌属，其中哈夫尼亚菌属、气单胞菌属和柠檬 酸菌属量最高，达106cfu/g数量级，其他三种菌群在105cfu/g数量级，没有检测到拉恩 氏菌属。 用 ERIC-PCR 方法对 4 种鱼肠道菌群进行扩增，得到了每一种鱼的肠道菌群的 ERIC-PCR 指纹图谱，并采用 NTSYS-pc 软件形成这四种鱼的肠道菌群聚类树状图， 鲢鱼和草鱼的相似性为 0.64，说明这两种鱼肠道菌群相似性较高，而鲤鱼和鲫鱼相似 性较差，且与鲢鱼和草鱼差异也很大，这很可能与这四种鱼的食性和生长的水层有很 大关系。 本研究的总体结论为：本研究采用常规生化试验和ERIC-PCR技术对山东省东平 湖（山东省第二大淡水湖）常见4种淡水鱼的肠道菌群的组成进行了研究，确定了这4 种淡水鱼肠道内优势菌群的种类和数量以及建立了它们的ERIC-PCR指纹图谱，并分 析了它们之间的相似性，从而为本地区鱼类疾病的防治、微生物类添加剂以及微生态 育种提供理论依据。 关键词：东平湖；淡水鱼；肠道菌群；细菌数量；细菌种类；ERIC-PCR   2 山东农业大学硕士专业学位论文 Abstract Fish intestinal flora, as a normal component, together hosts and aquatic environment, forms a mutually dependent and reliable micro-ecosystem, plays an important role in digestion，absorption, immune response, organ development and so on，and affects growth, development and physiology and pathology of fish. A micro-ecosystem study