酿酒葡萄分支酸合成酶基因（VvCS）的克隆与表达分析.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2012年，第 31卷，第 1期，第 1319页 GenomicsandAppliedBiology，2012，Vo1．31，No．1，13—19 研究论文 ResearchArticle 酿酒葡萄分支酸合成酶基N(VvCS)的克隆与表达分析 张珍珍 李小溪 问亚琴 潘秋红 中国农业大学食品科学与营养工程学院葡萄与葡萄酒研究中心，北京，100083 通讯作者，panqh@cau．edu．cn 摘 要 本研究以酿酒葡萄(Vitisvin r 品种赤霞珠(CabemetSauvignon))~霞多丽(Chardonnay)为试材，采 用 Z。。克隆和分子克隆相结合的策略，从果实中克隆到分支酸合成酶基因，命名为 VvCS。该基因的 cDNA编码区全长 1312bp，编码 436个氨基酸残基，预测其编码蛋 白质分子量为 46．9l ，等 电点为 7．8；生 物信息学分析显示 C5的DNA全长 7117bp，包含 13个外显子和 12个 内含子，定位于葡萄的第 l3号染 色体上。 cS编码的蛋白与其它植物来源 的分支酸合成酶在氨基酸水平上的同源性为 75％左右；实时荧光 定量 PCR分析表 明 在葡萄果实、茎、叶和叶柄组织中均有表达，且在果皮、果肉和种子中的表达变化 趋势相似 ，与盛花后 5周的果实相 比，盛花后 11周果实各部位 中 表达丰度均有不同程度增加 。 关键词 酿酒葡萄，分支酸合成酶(CS)，insilico克隆，基因表达 CloningandExpressionAnalysisofGeneEncodingChorismateSynthasein W inegrapes ZhangZhenzhen LiXiaoxi WenYaqin PanQiuhong CenrteforViticultureEnology，CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing，100083 Correspondingauthor，panqh@cau．edu．cn DOI：10．3969／gab．031．000013 Abstract Ageneencodingchorismatesynthase，namedVvCS，wasclonedfromwinegrapeberries(Vitisvinifer throughadoptingbothinsilicocloningandmolecularcloningstrategies．Thefull—lengthcDNA ofVvCScontained anopenreadingflameof1312bpinlength，whichencodedapolypeptideof436aminoacidresidueswitha molecularmassof46．9kD andapIof7．8．BioinformaticsanalysisshowedthatthegenomicVvCSgenerfom genomicDNAlocatingonthe13thchromosomeconsistedof7117bpinlength，including13exonsand12introns． ThesequencehomologyanalysisrevealedthattheVvCShadthehomoloyg ofapproximately75％ataminoacidlevel comparingwithotherplantCSproteinsdepositedinGenBank．RealtimePCR analysisexhibitedtheVvCSgene transcriptionallyexpressedinallthetestedtissuesincludingfiuits，stems，leavesandpetioles，andsimilartrendsin thetranscriptabundancewereobservedamongsttheskin，pulpandseeds．Furthermore，thetranscriptabun danceof thesethreetissuesintheberriesof11weeksafterfullyfloweringshowedrelativelyhigherthanthatoftheberries of5weeksafterufllyflowering． Key