羧酸酯酶引起棉蚜对氧化乐果和溴氰菊酯抗性分子机制.pdfVIP

中文摘要 播，给农业生产造成严重损失。长期以来，棉蚜的防治一直以化学防治为主，棉蚜对有机磷、氨 基甲酸酯、拟除虫菊酯等多种杀虫剂产生了抗药性。已成为抗药性严重和难以治理的害虫之一。 本研究以氧化乐果和溴氰菊酯实验室和田间抗性品系棉蚜为研究对象，从抗性选育、生物化 学、分子生物学和蛋白代谢角度对抗性机理进行了研究，其结果如下： 1．运用群体选育法选育了棉蚜氧化乐果抗性品系，相对于实验室敏感品系抗性倍数为21．72倍。 和ct-NP五种底物对氧化乐果抗性和敏感品系羧酸酯酶活性进行了研究，抗性品系羧酸酯酶 和ct-NP对两品系总酯酶活性研究表明抗性品系比敏感高3～7倍。敏感品系对谷胱甘肽．S． 转移酶(GSTs)水解活性比抗性高3倍。 DRR抗性品系对GSTs水解活性为敏感的1．42倍，两者差异显著。 3．增效剂PBO对阿瓦提抗性品系羧酸酯酶抑制中浓度显著低于敏感品系；而DEF对抗性羧酸 酯酶抑制巾浓度显著高于敏感品系。利』{』酶标仪动力学对阿瓦提抗性和敏感品系总酯酶和羧 酸酯酶进行了研究，结果表明：抗性个体羧酸酯酶和总酯酶活性主要分布于高活性区段，而 敏感品系主要分布丁低活性区段；用4．8×10。M的DEF对抗性和敏感羧酸酯酶和总酯酶抑制 发现，DEF对抗性品系总酯酶和羧酸酯酶活性抑制率总体比敏感低，这表明抗性品系总酯酶 和羧酸酯酶活性高丁敏感品系。 究，抗性品系棉蚜羧酸酯酶基因mRNA相对表达量为敏感品系的4．54倍，表明羧酸酯酶基 因的过量表达可能参与氧化乐果抗性机制的形成。 性和敏感品系羧酸酯酶结构基闻问的差异。溴氰菊酯抗性品系(DRR)棉蚜羧酸酯酶基因 对表达量为敏感品系的6．61倍。RT-PCR克隆获得的阿瓦提抗性和敏感品系羧酸酯酶基网 酸水平上具有99．81％的同源性；与敏感品系相比，抗性品系中仅有一个碱基发生了变化，导 致一个氨基酸的变化：A球LVal，但该突变位点不位于活性中心，两品系羧酸酯酶活性中心 和信号域均未发生变化，由此推断棉蚜溴氰菊酯抗性主要由羧酸酯酶基因转录水平的增加引 起，Al矿LVal突变可能不参与抗性机制。 6．利用荧光分光光度计测定了氧化乐果和溴氰菊酯棉蚜品系羧酸酯酶对高效氯氰菊酯和溴氰菊 酯衍生化合物代谢，结果表明：氧化乐果抗性品系羧酸酯酶对溴氰菊酯替代底物的水解活性 比敏感品系高2．94倍，对高效氯氰菊酯替代底物的水解活性比敏感品系高1．67倍：溴氰菊酯 抗性品系羧酸酯酶对溴氰菊酯水解活性比敏感品系高1．23倍，对高效氯氰菊酯水解活性比敏 感品系高1．79倍，该结论进一步验证了羧酸酯酶活性提高增加了对杀虫剂的水解代谢能力， 参与棉蚜氧化乐果和溴氰菊酯的抗性机制形成。 关键词：棉蚜，羧酸酯酶，氧化乐果，溴氰菊酯，抗性机制 II Abstract cotton aworldwideofa Aphis number gossypii(Glover)(Hemiptera：Aphididae)，theaphid，is pest of and virustransmission，ThecoRon agriculturallyimportantcrops，causingdamagethroughfeeding controlis onthe of with aphid primarilydependentapplicationinsecticides，often multipleapplications each in ofinsect