5氮杂胞苷调控TIP30基因表达对人结直肠癌细胞氟尿嘧啶敏感性的影响.pdfVIP

·824· ．基础研究． 5一氮杂胞苷调控TIP30基因表达对人结直肠癌 细胞氟尿嘧啶敏感性的影响 陈小兵 陈贝贝 李剑 王新锋马一杰 罗素霞 吕慧芳 【摘要】 目的探讨5一氮杂胞苷(5-Aza—dC)对结直肠癌细胞中TIP30基因表达的影响，并探讨 其与氟尿嘧啶(5一Fu)敏感性的关系。方法5-Aza—dC处理结直肠癌HCTll6细胞，采用甲基化特异 性PCR(MSP)方法检测TIP30基因启动子CpG岛甲基化状态，逆转录PCR检测TIP30mRNA表达， Western blot法检测TIP30蛋白的表达，四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HCTll6细胞对5．Fu的敏感 性。结果 未经5-Aza—dC处理的HCTll6细胞中，TIP30基因启动子完全甲基化。-Aza．dC处理 HCTll6细胞3d后去除5-Aza—dC，HCTll6细胞TIP30基因非甲基化产物阳性，启动子去甲基化。随 着5-Aza-dC去除时问的延长，HCTll6细胞中TIP30基因启动子甲基化产物和非甲基化产物均为阳 性，即启动子部分甲基化，部分非甲基化；去除5-Aza—dC第10天，TIP30基因启动子甲基化产物阳性， TIP30基因启动子重新甲基化。未经5-Aza．dC处理的结直肠癌HCTll6细胞TIP30mRNA和蛋白不 表达。5-Aza-dC处理结直肠癌HCTll6细胞3d后去除5-Aza—dC，TIP30mRNA和蛋白表达明显增 强。随着5-Aza—dC去除时间的延长，TIP30mRNA和蛋白表达水平逐渐降低，第10天达到最低水平。 制浓度(Ic，。)分别为41．62、33．17和4．96斗∥rnl。结论TIP30基因表达差异可能与其启动子甲基 化状态有关，且TIP30基因启动子甲基化差异与结直肠癌细胞对化疗药物的敏感性相关。 【主题词】 结直肠肿瘤；5-氮杂胞苷；DNA甲基化；氟尿嘧啶；敏感性 Effectsof on in 5-Aza-dC5-Fu TIlt30 human chemosensitivitybymodulatinggeneexpression colorectalcancercellsCHEN Xiao—bing+，C船ⅣBei一6ei，LIJian，形4NG舡n一屉鹳，删ri-jie，L明I鼠一 Oncol097，CancerofZhengzhou xia，￡矿胍扣嚼+DepartmentofHospital University，Zhengzhou450008，China author：LV CorrespondingHui-fang．Emaif：lhfO]I]@yahoo．con．cn To theeffectof TIP30 【Abstract】Objectiveinvestigate 5-Aza-2-deoxycytidine(5-Aza—dC)on andthe betweenTIP30 andthe to5一fluouracil(5．Fu)in geneexpressionrelationship expressionsensitivity eolorectalcancercells．MethodsThe ofTIP30 inHCTl16colorectalcells methylationprofile gene cancer wasdetermined PCR．ThelevelsofTIP30mRNAand weredetermined bymethylation．specific protein by RT．PCRandWesternblotafterthe5-Aza—dC