食管鳞癌组织中galectin3与MMP2表达的意义.DOCVIP

临床医学论文-食管鳞癌组织中galectin3与MMP2表达的意义 ????????? 作者：石菲，彭贵勇，孙永刚，姚大鹏?? 【摘要】? 目的： 研究 galectin3 在食管癌组织中的表达及其与基质金属蛋白酶 MMP2 的表达间的关系. 方法： 用免疫组化 SP 法分别检测 galectin3 和 MMP2 在 80 例食管癌和 22 例正常食管组织中的表达情况. 并对肿瘤病理分级、浸润深度及淋巴结转移情况进行统计学分析. 结果： 食管癌组织中Galectin3 蛋白表达率为 77.5%，显著高于正常食管组织（27.3%, P0.05）. Galectin3 高表达与食管癌的病理分级、浸润及淋巴结转移有关. Galectin3 与 MMP2 表达呈正相关（P0.05）. 结论： Galectin3 在食管癌中表达增强，它的高表达对判断食管癌的恶性程度、浸润甚至转移有重要价值. MMP2 的高表达使 Galectin3 上调. 【关键词】? 食管肿瘤；半乳糖凝集素3；明胶酶A；免疫组织化学 ???? 0引言 ??? Galectins (β半乳糖苷结合蛋白) 是生物体内广泛存在的一大类结合蛋白，属于凝集素家族. Galectin3 是该家族的重要成员之一，它广泛表达于上皮细胞和免疫细胞，存在于细胞质及胞核内，参与多种生物学过程，如：调节细胞—细胞、细胞—基质间的相互作用，参与细胞的增殖、分化、局部免疫调节和凋亡等，与肿瘤的转移、浸润、生长和黏附密切相关. 目前，galectin3 对恶性肿瘤演进的影响作用在前列腺癌、甲状腺癌、结肠癌、胃癌和乳腺癌中已有研究，而它与食管鳞癌的关系鲜有报道. 我们探讨 galectin3 蛋白在食管鳞癌中的表达情况以及其与 MMP2 的关系. ??? 1材料和方法 ??? 1.1材料第三军医大学西南医院 200609/200705手术病理科证实为食管鳞癌标本 80 例，术前未行放化疗；男 47 例，女33 例. 年龄 27~80（平均46.6）岁. 病理Ⅰ级 30 例，Ⅱ级 32 例，Ⅲ级 18 例；有、无区域淋巴结转移分别为 34和46 例. 取距病变组织 5 cm以上的食管正常组织 22 例作正常对照组. 采取新鲜标本后，即置于40 g/L甲醛液固定过夜，次日取材、脱水、包埋. 石蜡连续切片，片厚 4 μm，行常规 HE 染色. 即用型鼠抗人 galectin3 mAb为福州迈新生物技术有限公司产品；即用型兔多抗MMP2, SP 试剂盒、DAB 显色试剂均由北京中杉公司提供. ??? 1.2方法免疫组织化学采用 SP法，以间变型大细胞淋巴瘤作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性空白对照. 石蜡切片常规脱蜡至水，用 30 mL/L H2O2室温下孵育 30 min（以封闭内源性过氧化物酶），PBS 漂洗 5 min×3次. 将切片置于pH 6.0 的枸橼酸盐缓冲液中，微波炉加热修复抗原 20 min（温度控制在 95～100℃）. 取出自然冷却至室温后，用 PBS 漂洗 5 min× 3 次. 滴加 100? mL/L山羊血清室温下孵育 30min. 倾去血清，滴加一抗，置于湿盒内，4℃ 冰箱过夜. 同法冲洗切片，滴加生物素化二抗工作液，置于湿盒中，37℃ 孵育25 min，同法冲洗切片，滴加链酶亲和素过氧化物酶复合体（三抗），37℃ 孵育25 min，再冲洗切片. 滴加DAB显色剂，镜下观察控制反应时间，蒸馏水洗中止，切片苏木素复染，盐酸酒精分化返蓝，脱水封片. galectin3和MMP2 均以胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性染色细胞，采用阳性染色强度结合阳性细胞所占百分比进行判断. 在 400倍视野下每张切片随机观察 4 个视野，将切片中平均阳性细胞比例及染色深浅分别计 0～3 分，切片中无阳性细胞，0分；阳性细胞＜25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；75%，4分. 染色强度以多数细胞为准：无着色，0分；淡黄色，1分；黄或深黄色，2分；褐或棕褐色，3分. 再按这两项指标的积分相加将结果分为 4 级：0 分为“”；1~2 分为“+”；3~4 分为“”；5～6 分为“”. 其中“”“”为强阳性表达. ??? 统计学处理： 运用 SPSS? 11.0统计分析软件，率的比较采用χ2检验，galectin3 表达与MMP2 表达间的相关性分析采用Spearman秩相关. ??? 2结果 ??? 2.1食管鳞癌组织中galectin3的分布Galectin3 阳性信号呈棕黄色颗粒状或线网状染色，大多数病例定位于细胞质（图1A），少数位于间质. Galectin3 蛋白在肿瘤组织中呈异质性表达，即在肿瘤