CK20检测大肠癌淋巴结微小转移的免疫组织化学研究.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 {.细胞角蛋白20(cytokeratin20,CK20)是近年来被确定的其表 达绝大多数只限于胃和大肠上皮的一种多肤，当正常表达CK20 的上皮恶变时，这些癌往往也表达CK20，而且转移癌与原发癌无 异。CK20表达不被表现在内皮和淋巴细胞或其他在正常淋巴结 中可被发现的细胞类型，我们可以利用它检测大肠癌琳巴结微转 移，目前有关CK20用于检测大肠癌淋巴结微转移的文献不多，而 且文献大多从CK20基因表达方面深人研 们尝试用免疫组 织化学方法对大肠癌淋巴结微转移情况进: 七研究，探讨CK20 在肿瘤临床中的应用，为大肠癌转移的早期诊断、明确病理分期提 供理论依据。 实验材料 ‘共检淋巴结249枚，采自1998年9月至2000年7月于中国 医科大学第一临床学院肿瘤科57例大肠癌根治术后标本。其中 男性32例，女性25例;年龄29一88岁;结肠癌26例，直肠癌31 例;DukesB期为48例，Dukes,C期为9例。所有标本均经系统病 理检查。病理资料按常规分类。鼠抗人单克隆抗细胞角蛋白20 抗体、鼠/兔S一P超敏试剂盒、胰蛋白酶试剂盒、0.05%DAB均购 自福建迈新生物技术开发公司。 实验方法 每一标本均经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，并被重新制 备成连续四张5pm切片，其中选取两张用于常规病理组织学染 色，另两张用于免疫组织化学染色。病理组织学染色按常规HE 染色方法染色。免疫组织化学染色采用S一P免疫组织化学方法 染色，所用一抗为鼠抗人单克隆抗细胞角蛋白20抗体，染色过程 中需胰蛋白酶消化处理，抗体、胰酶及S一P试剂盒均为即用型。 染色过程严格按鼠/兔S一P超敏试剂盒说明书进行操作。以0 Olnmol/1PBS(PH7.4)代替一抗作为阴性对照，以原发大肠癌的 组织切片作为阳性对照。染色切片均经2位有经验病理医师阅 片，采用双盲法。对实验结果及临床资料进行统计学分析(卡方 检验)。 实验结果 1.常规病理组织学染色和CK20免疫组织化学染色检出淋巴 结转移情况。本组57例大肠癌经常规病理组织学(HE染色)检 出有淋巴结转移为9例(15.8%);经CK20免疫组织化学染色检 出有淋巴结转移17例(29.8%)。常规病理组织学染色阴性的48 例DukesB-期病例中，经CK20免疫组织化学染色发现8例存在淋 巴结微小转移。249枚淋巴结经常规组织病理学染色检出淋巴结 转移是16枚(6.4%);经CK20免疫组织化学染色检出淋巴结转 移34枚(13.7%)。在常规病理组织学检查阴性的233枚淋巴结 中，CK20免疫组织化学方法检出微小转移18枚(7.7%)，其中在 Dukes$期比HE染色多检出微小转移13枚，在DukesC期多检出 微小转移5枚。 2.大肠癌临床病理资料与两种染色方法淋巴结转移检出之 间的关系。常规组织病理染色(HE染色)发现淋巴结转移的例数 与CK20免疫组织化学染色发现淋巴结转移的例数在Dukest期 存在显著性差别(P0.01),CK20免疫组织化学染色明显增加了 淋巴结转移的检出。 3.CK20免疫组织化学染色检出淋巴结转移阳性结果在不同 临床病理因素之间的比较。CK20免疫组织化学染色检出淋巴结 转移阳性率在不同淋巴结数目之间存在显著性差别(P0.01), 在不同Dukes分期之间及不同大体形态之间也存在显著性差别 (P0.05)。 讨 论 尽管实施了原发肿瘤根治切除，仍有大约50%大肠癌患者死 于局部肿瘤复发或转移，而且其中20%一30%常规组织学检查无 淋巴结转移(DukesAB期)的患者由于远处转移或局部复发于5 年内死亡。在大肠癌根治术复发或转移中，其中一个原因为淋巴 结亚临床灶转移即淋巴结微小转移，所谓淋巴结微小转移是指常 规病理检查难以发现的小于2mm的转移。几种方法已经被用于 淋巴结微小转移的检测，免疫学方法和分子生物学技术已经体现 出其优越性和临床价值。本实验采