FHIT基因在肝细胞性肝癌中缺失的研究.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 在我国，肝细胞性肝癌(HCC)是恶性度最高的肿瘤之一，死 亡率在恶性肿瘤中列第二位，严重威协人类的健康和生命。目前 其发病机制尚不十分清楚。肝细胞性肝癌的发生、发展及演变涉 及一个多因素、多步骤的复杂过程。其中包括致癌基因的激活和 肿瘤抑制基因的失活。目前肝细胞性肝癌没有一个较好的治疗手 段，因此，对于肝细胞性肝癌的抑癌基因研究意义重大，它将有助 于寻找肝细胞性肝癌基因治疗的靶基因，为肝细胞性肝癌的基因 治疗发展提供一定的理论依据。 / 一份料和方法 材料: 取自1993年2月至1998年9月中国医科大学附属第一临床 医院外科手术切除的标本共30例。其中8例为术后速冻标本，冷 藏于一70℃冰箱，22例术后经福尔马林溶液固定及石蜡包埋。术 后病理证实为肝细胞性肝癌(HCC)。病理分级采用Edmoson分 级。病人年龄31岁至67岁，平均年龄51岁。其中男性26名，女 性4名。HBSAg阳性者8名，阴性者12名。伴有肝硬化者20名， 无肝硬化者10名。 方法: 1.提取DNA:分别从冰冻组织和石蜡标本中采用饱和抓化钠 法提取DNA. 2.PCR扩增:引物为D3S1234,D3S1300,D3S4103. PCR扩增总反应体系为8闪。以95℃予变性5分钟，随后以 949030秒，WOO秒，72`O40秒，30个循环扩增。72℃延伸6分 钟。置4℃冰箱备用。 3.聚丙烯酞胺凝胶电泳。 4.银染显影后照像保存。 5.杂合性缺失判定: 癌组织条带比同一病人的正常组织条带消失或相对密度小于 50%，为杂合性缺失。 8.统计方法:Fishersexact检验。 结 果 在30例肝细胞性肝癌病人中发生LOH的为11例，总缺失率 为36.67%。其中伴有肝硬化的HCC的LOH率为45%，伴有乙 肝病毒感染的肝细胞性肝癌的LOH率为50%，二者均有的肝细 胞性肝癌LOH率为63.6%。病理分级为1V级的肝细胞性肝癌的 LOH率为86%，经统计分析，伴有肝硬化和/或乙肝病毒感染的肝 细胞性肝癌的LOH率与不伴有肝硬化和/或乙肝病毒感染的肝细 胞性肝癌的LOH率的差异无显著性。而病理分级为W级的肝细 胞性肝癌的LOH率与Iff级以下的LOH率相比差异有显著性(P二 0.004)。 讨 论 目前认为，肝细胞性肝癌的发生是一个多因素多步骤的过程， 其确切发病机制尚不清楚。目前对于肝细胞性肝癌的治疗尚无较 好的方法。因此，加强对乎肝细胞性肝癌的抑癌基因研究，对于肝 细胞性肝癌的预防和治疗的发展具有重要意义。对细胞增殖产生 抑制的基因，被称作抑癌基因。即抑癌基因是在机体正常时表达， 在恶性转化时缺失的基因。因此，在分子水平研究肝细胞性肝癌 的发病机理，对于肝细胞性肝癌的预防，诊断及治疗的发展具有重 要意义。在本研究中，利用PCR技术对于30例肝细胞性肝癌组 织进行检测，发现11例出现FHIT基因的杂合性丢失。丢失率为 36.67%。说明MIT基因在肝细胞性肝癌中可能是一个抑癌基 因。FHIT基因位于染色体3p14.2，因其含有脆性位点FRA3B，且 横跨家族性肾细胞癌的易位点(3;8)(p14.2;g24)，故结构不稳 定，在大多数人类原发性肿瘤中发现改变，改变以缺失为主，也可 以有外源序列的插人。现在在许多肿瘤中发现了FHIT基因的高 比例缺失，如胃癌(56%)，食道癌(50%)，结肠癌(37%)，肺癌 (40%)及乳腺癌等。目前对于MIT基因与肝细胞性肝癌的研究 进行较少，且有争议。国内尚无同类研究报道。在肺癌组织中发 现MIT基因转录本的缺失。在肿瘤的发生和发展中，MIT基因 可以作为环境致癌因素进攻的靶点，MIT缺失可能是肿瘤发生的 始动。因此，我们用有无肝硬化及乙肝病毒感染来分类，探讨乙肝 病毒感染及肝硬化与肝细胞性肝癌的相关性，虽然伴有乙肝病毒 感染和/或肝硬化的病例的FHIT基因的LOH率相对高一些，但是 与无乙肝病毒感染和/或肝硬化的病例的LOH率的差异并无统计 学的显著性。说明MIT基