IL1β对人成骨细胞芳香化酶活性的影响.pdfVIP

月 ，肠 中 文 摘 要 前 言 近年来由于绝经期骨质疏松导致骨折的发病率不断增高，严 影响了中老年妇女的生活质童，绝经期骨质疏松愈来愈受到全 世界的关注，同时亦成为医学研究热点之一。 虽然人们知道雌激素缺乏导致的骨质疏松是由子过A的骨吸 收大于骨形成而引起的，但雌激素缺乏对成骨细胞功能形响的机 理尚不明确。有学者在成骨细胞中发现雌雄激素受体后，性激素 对成骨细胞功能的影响引起广泛关注。 最近发现，成骨细胞与许多组织一样，存在雌激素合成所需要 的各种酶类，如芳香化酶，硫酸醋酶,5。一还原醉,17p一HSD等。 芳香化酶是一种细胞色素P450醉，是雄激素转换成雌激素的限速 酶。绝经后妇女体内雌激素几乎全部由雄烯二酮转化而成，而主 要作用酶为芳香化酶。因此认为成骨细胞具有类固醉局部转换、 调节类固醇激素的生物活性，以此影响成骨细胞的功能。IL一1p 是一个潜在的骨吸收因子的调节剂，能调节成熟的破骨细胞活性， 并在绝经后骨质疏松的发 重要作用，但是IL一1(3对成骨细 胞的影响尚无报道 本实验旨在研究IL一1p对人成骨细胞中芳香化酶活性及芳 香化酶mRNA表达的影响，从而探索导致骨质疏松的另一危险因 子，为新的治疗途径提供理论基础。 材 料 与 方 法 一、材料:小牛血清(FBS)，培养液(MEM)购于GIBCO 气 ·1 (GrandIsland,NY)，1〔3(一’H)A雄烯二酮(SA=2.2G砂}1飞 购于新英格兰核原子公司(BostonMA)，未标记的类固醉购于 SIGMA化学公司(st.Louis,MO)，人IL一1受体拮抗剂(an‘一hu- manIL一1receptorantagonist,IL一Ira)购于PeproTechECLTD (London,UK),IL一1p购于Otsuka化学公司(Tokyo,Japan), Isogen试剂购于日本NippongeneCo.异丙酚，抓仿，澳乙锭由日本 昭和大学妇产科实验室提供。 二、方法: 1·细胞培养:人成骨细胞株(humanosteoblast一likecellline, HOS)由美国升peCultureCollection提供。培养液为MEM，加有 10%FBS,Penicillin0.1unit/ml以及链霉素wm/00l1 。设对照组 和实验组，于实验组培养中，分别力a人含有不同浓度IL一邓和或 IL一Ira的培养液。对对照组皿中则不加IL一1p和IL一Ira, 2.芳香化酶活性测定:在加人不同浓度的IL一Ip和/或IL- 1，培养24小时后，再加人 1〔一H)A雄烯二酮继续培养24小 时。用液闪计数器(AlocaLSC一652,Tokyo)测定3Hwater的放 射强度，设对照组为10090，计算各实脸组芳香化醉活性。 3。成骨细胞中芳香化醉RNA的提取 RNA提取采用AGPC法。 4.RT一PCR 反转录醉聚合醉链反应采用GeneAmpRNAPCR核心试剂盒 (PERKINELEMER,U.S.A.)并筑说明程序进行。 5.统计分析:采用SAS6.12统计软件包，进行单因索方差分 析及q检验. 结 果 一、IL一10对HOS芳香化醉活性形响: ·2 ·