IL8在脂多糖致急性肺损伤中的作用及维拉帕米的保护作用.pdfVIP

中 文 摘 要 前 官 一隐性肺损伤(AU)是由众多病因引起的急性肺功能和形态学 损害。目前认为，急性肺损伤时大A的多形核白细胞(PMN)于肺 内扣押是其介导肺血管通透性增加、肺水肿、微血栓形成及上皮广 泛损伤的关键所在;也是临床ICU中一类极常见且十分危险的病 症，如处理不及时，极易引起成人呼吸窘迫综合症导致死亡。我国 尚无有关发病率的报道.美国每年约有lso,oa)人 亡率高 达so%以上。可见ALI是一种严重危害人类健康的 急性肺损伤的发病机制不清，有证据表明，燃扣押在肺内的 中性白细胞(PMN)是造成炎症反应的重要效应细胞 ，细胞因子及 其网络在急性肺损伤发生发展中的作用日益引起人们的关注。IL 一8是由单核细胞和内皮细胞合成分泌的对中性粒细胞具有极强 趋化活化作用的一种重要的细胞因子，与炎症反应关系密切。体 外研究表明，IL一8与PMN表面特异性受体结合，导致细胞变形 反应、脱颗粒反应、呼吸爆发、以及释放溶酶体和过氧化物，从而促 进炎症反应。Kunkel的研究证实当IL一8结合高亲和性的PMN 表面受体后，通过GTP结合蛋白激活PMN，发挥生物学效应，这一 过程具有.caz及蛋白激酶C(PKC)依赖性。有资料显示此激活过 程的信号传递系统与PMN趋化机制相同。 了国外已有实验证实IL一8所致粒细胞内生化产物的变化可被 川阻滞PI17一Ilyaroxywo曲画n、星状抱子素，。蛋白阻滞剂百 日咳毒素(PTX)以及钙离子阻断剂异搏定、心痛定、地尔硫卓等特 异性阻滞，表明IL一8受体介导的信号传递既涉及细胞膜钙通道 开放，又涉及受体偶联的对FIX敏感的G蛋白亚单位转导、PKC ·1· 激活和磷脂酷肌醉的代谢，国内尚未见相关实验性文献报道。 我们采用大肠杆菌脂多糖(LPS，为内毒素的主要成分)静脉 内注射建立Wistar大鼠ALI实验模型，检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)、肺泡巨噬细胞(AM)培养上清及外周血清中IL一8水平， 肺支气管肺泡灌洗液中细胞总分数计数，肺组织匀浆髓过氧化物 酶活性侧定，评价IL一8在AU发生、发展中的作用;通过钙离子 通道阻断剂维拉帕米(Verapamil)对Wistar大鼠US致AU模型 的干预作用，探索其对大鼠实验性ALI的保护作用。 实验材料 1.实验动物:雄性Wistar大鼠30只(体重180-2208，由中国 医科大学实验动物部提供)。 2.主要试剂: 脂多箱(LPS丐几sigma) 维拉帕米(Verapamli上海禾丰制药有限公司批号:980401) 白细胞介索一8放免药盒(IL一8RIAKIT北京解放军总医院 科技开发中心放免所) 翻过暇化物醉(MM )侧试盒(南京建成生物工程研究所) 3.主要仪器，GC一12 ，放射免疫计数器(中国科学技术大 学科技实业总公司中佳光电仪器分公司) 匀浆机HeidolphDIAx900(德国) 超声波粉碎机UP50H(德国柏林G·S公司) 分光光度计(SMmadzuUV260Japan) 光镜及照相器材(OlympusJapan) ·2 · 实验方法 1.大鼠AU模型的建立:将大鼠装人一自制的鼠固定装置中， 先用75%的酒精清洗消毒鼠尾，再涂适t二甲苯，待尾静脉充盈 可辨，即从尾静脉注射脂多糖5mg/吨，然后将鼠放人鼠笼内自由 活动。 2.实验分组:30只雄性健康Witar大鼠随机分为三组: (1)ALI组(LPS组);10只，于尾静脉注射脂多糖5mg/kg, (2)LPS+Verapamil组:10只，于尾静脉注射脂多搪5mg/kg 后立即注射维拉帕米(Verapamil)0.5mg/kga (3)对照(Control)组:10只，于尾静脉注射等体积的生理盐水 代替月旨多糖。 所有动物均于注射脂多糖(LP