p53、Bcl2蛋白在人类肺癌组织中表达及其与血管新生关系的研究.pdfVIP

中文 摘 要 前 言 俪瘤不仅是增殖和分化异常的疾病，同时也是凋亡异常的疾 病。调控增殖/凋亡的基因的异常可影响肿瘤的发生、进展。包括 肺癌在内的多种实体瘤的生长和转移是血管新生依赖性的。血管 新生通常以肿瘤内微血管密度(intratumoralmicmvesseldensiyt, iMVD)表示。凋亡受凋亡相关基因调控，Bcl一2能抑制细胞凋 亡，野生型p53作为肿瘤抑制基因，亦能介导细胞凋亡。研究表 明，血管新生与细胞凋亡有关，Bc卜2,p53作为凋亡调控的相关 基因，亦可能与血管新生的调节有关。!本研究通过鱼9 学 方法，对63例手术切除人肺癌标本进行CD34,Bcl一2,p53染色， 通过其表达情况，并与临床资料对比，探讨了卢3,Bcl一2在63例 人肺癌组织中表达及其与血管新生的关系。 实验 材料 ,1.病例选择 随机选择1997年3月至1998年3月我院63例人肺癌手术 病例，年龄34一72岁(58.5t:9.5岁)，男39例，女24例，其中非 小细胞肺癌55例(腺癌38例、鳞癌17例)，小细胞肺癌8例，组织 学诊断采用1981年WHO肺癌组织学分类标准、TNM分期采用 1997年国际抗癌联%(UICC)肺癌分期标准。 2.材料 鼠抗人CD34单克隆抗体，兔抗人p53多克隆抗体，鼠抗人 Bcl一2单克隆抗体，生物素化马抗鼠、羊抗兔二抗及ABC复合物。 实验方 法 1.免疫组化法检测 ·1· (1)iMVD的测定 采用ABC法。应用抗CD34单抗1:100稀释，4%湿盒内孵育 过夜(16小时),1:100稀释生物素化马抗鼠二抗室温下湿盒内孵 育2小时，1:400稀释ABC复合物室温下湿盒内孵育2小时，DAB 显色10一30分钟，苏木素复染，常规封片。 (2)户3蛋白及Bcl-2蛋白的检测 采用ABC法。0.0lM柠檬酸缓冲液抗原修复，电热炉加热， 维持94一98`C15min,抗户3蛋白多克隆抗体1:200稀释、抗 Bcl一2蛋白单抗1:200稀释，4℃湿盒内过夜(16小时)，即用型生 物素化羊抗兔、马抗鼠二抗室温下湿盒内孵育30分钟，即用型 ABC复合物室温下孵育30分钟，DAB显色10一20分钟，苏木素 复染，常规封片。 2.统计学分析 应用SPSS10.0软件，进行t检验r，xxz检验,枷annan等级相 关分析，P0.05表示有统计学差异，P0.01表示有显著统计学 差异。 实 验 结 果 人肺癌户3,Bc1-2蛋白表达及其与iMVD的关系 63例中必3染色阳性例数为34例(54%),p53的表达主要位 于肺痛细胞的细胞核，偶见于胞浆。Bcl一2染色阳性例数为28例 (44.4%)，Bcl一2的表达主要位于胞浆、胞膜和细胞器膜。所有 肺癌组织以CD34标记的iMVD为4一138.7(44.5土29)/x400, iMVD,户3的表达与组织类型、临床分期、病人性别、年龄等参数 无关。I、11期Bel一2(55.3%)的表达明显高于llI,N期(28%)， P0.05，而与组织类型等其它临床参数无统计学差异。Bcl一2 的表达与户3的表达不相关。户3,Bcl一2的表达均与iMVD未见 明显相关。 ·2 · 讨 论 血管新生(Angiogenesis)是由已经存在的微血管芽生出新的 毛细血管。包括肺癌在内的多种实体瘤的生长和转移是血管新生 依赖性的。肿瘤的血管新生是由血管新生刺激因子和抑制因子之 间平衡来调节。通常以肿瘤内微血管密度(intmtumoralmicroves- seldensiyt,iMVD)来评价血管新生的程度。在肿瘤发生发展中， 肿瘤细胞凋亡活动控制失常同其增殖、分化活动失控同样重要。 凋亡是由凋亡相关基因调控的细胞自身程序化死亡。Bel-2最 早发现于非何杰金B细胞琳巴瘤，为