p73和p53在肾癌中的表达及其意义.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 肾癌是最常见的肾脏实质性肿瘤。但对于导致肾脏癌变的细 胞和分子机制仍然不十分清楚。越来越多的证据表明致癌作用的 发生必须是调控基因突变的积累。包括癌基因的激活和抑癌基因 的失活或缺失。在众多的候选基因中p53基因被认为是基因组的 主要保护基因。因为它的作用是调整细胞的生长和死亡。最近发 现了一个新的与p53有明显同源家族性的基因，且命名为p73 (Kaghad等，1997)。价3定位于1号染色体短臂。文献报导户3 基因可以激活两3的靶基因，包括哗1.a基因，导致细胞凋亡。但 p73与p53不同的是在人类肿瘤中p73基因无明显的突变。到目 前为止还没有文献报导p73在肾癌中的表达及其在肾癌中与p53 表达的相关性。本实验用免疫组化方法研究p73,p53蛋白在肾癌 中的表达及其相关性及与肾癌临床分期、病理分级、预后之间的关 系 。 丫实验材料 1.材料:收集中国医科大学第一临床学院泌尿外科1987年 1月一2001年1月期间住院行肾切除或肾癌根除术的癌组织石蜡 包埋标本，全部患者术前、术后均未行放疗、化疗及生物治疗。全 部标本均经病理科医生复查证实诊断。其中男性33例(72%), 女性13例(28016)。左侧30例，右侧15例，双侧1例。年龄32- 79岁，平均55岁。按细胞类型分为透明细胞癌28例，嗜色细胞 癌9例，其它类型9例(包括嫌色细胞癌，肾直管型，神经内分泌 21)。按Robson分期I期14例，II期12例，IQ一IV期20例。按 Fnhrman氏(1982)肾细胞痛形态分级系统:G,10例，几12例，几 ·1· 一G,24例。全部病例均经随访。选择15例癌旁正常肾组织做正 常对照，所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片厚 度为5pmo 2.试剂:兔抗人夕3多克隆抗体，工作浓度1:200，鼠抗人户3 突变型(DO一7)单克隆抗体，工作浓度1:1000 实 验 方 法 1.HE染色:所有切片均作HE染色。 2.采用免疫组织化学S一P法进行组织染色。 步骤:石蜡切片常规二甲苯脱蜡至水，3%H202孵育5分钟， 微波炉抗原修复，滴加抗原修复液，室温十分钟，PBS冲洗三次，加 10%正常山羊血清室温十分钟，去血清滴加稀释一抗，37T孵育1 小时，PBS冲洗3次，加二抗孵育10分钟，PBS冲洗3次，辣根酶 标记的链酶卵白素37`C孵育10分钟，PBS冲洗3次，DAB显色， 自来水充分冲洗，苏木素复染，透明封片。 3.阴性对照:以PBS代替一抗作阴性对照。阳性对照:已知 p73和p53染色阳性的肺癌组织切片。 4.结果判定:p73和户3阳性表达均定位于细胞核内，以细胞 核内出现棕黄色顾粒为阳性细胞。以着色细胞数〕10%为阳性 (十)，无阳性细胞或阳性细胞数10%为(一)。 5.统计学处理:两组间的比较用Xx检验，相关性分析用列联 表资料Xs检验，相关系数用Pearson系数，生存率曲线使用寿命表 (lifetable)法绘制，用Log一rank检验。 结 果 本组46例肾庙标本中哪 染色阳性19例占41.3%,卢3染 色阳性共17例，占37%。镜下所见p73,户3基因蛋白产物阳性反 应均呈棕黄色或棕褐色性颖粒,p73,p53染色均以细胞核为主。 ·2 · 15例正常肾组织p73和声3均无阳性染色。价3,户3蛋白阳性表 达与各病理类型、病理分级之间无显著性差异(P0.05)。p73, 户3蛋白阳性表达与临床分期之间:I期与II期、nI一W期之间有 显著性差异(P0.05)。 价3与户3蛋白共同阳性表达15例，共同阴性表达25例，相 关性分析P0.005,Person列联系数为0.59，表明肾癌组织中 p73和p53表达显著相关。本组病例中所有患者的五年生存率为 67.4%。p73和p53共同阳性表达的生存率与其余患者的生存率 明显不同，价3和户3共同阳性表达的五年生存率为40%，其余