SE后GDNF、GDNFRα和Ret在大鼠顶叶皮质和海马的表达.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 SE是神经科急症之一，若不及时治疗，可因合并生命功能衰 竭而死亡，或可造成永久性脑损害。神经营养因子，最初被发现于 神经细胞的正常发育过程中，不但对正常神经细胞的发育和分化 至关重要，也在多种病理损伤过程中对成熟神经细胞发挥了强有 力的保护作用，从而倍受关注。 一介DNF是对中脑腹侧的多巴胺神经元具有特异的神经营养作 用的神经营养因子，属于TGF一a超家族的远亲。GDNF在神经 系统分布广泛，不仅能促进多巴胺神经元的成熟和存活，而且能促 进中枢去甲肾上腺能和运动神经元以及周围神经感觉和交感神经 元等多种神经细胞的成熟和存活。GDNF的一个功能性受体由 Ret和GDNFRoc的复合物构成。Ret是PTK超家族的成员之一， 是GDNF传递信号的功能受体。GDNF通过RetPTK途径产生其 生物学效应。GDNFR。是一种通过GPI连接的细胞表面受体，它 与GDNF特异地结合并介导RetPTK的活性，是GDNF的连接受 体。通过对帕金森病、运动神经元病以及周围神经病的研究，使人 们对GDNF及其受体在神经系统疾病中的作用有了探人的了解。 本实验应用免疫组织化学方法对SE后顶叶皮质区(内便妇卿: 外侧中央前区)和海马区的GDNF,GDNFRa和Ret的动态表达进 行了观察，探讨了GDNF及其受体在大鼠SE造成脑部损伤中的 作用机制。 材料 与方 法 健康雄性Wistar大鼠50只，由中国医科大学实验动物中心提 供，体重200一220克。随机分成10组，每组5只大鼠;分别为对 照组、SE后1小时组、SE后2小时组、SE后4小时组、SE后6小 。1· 时组、SE后8小时组、SE后1天组、SE后3天组、SE后5天组、SE 后7天组。 动物模型采用铿一匹罗卡品大鼠SE模型。腹腔注射抓化铿 3mEq/kg，在注射后16一18小时予以匹罗卡品40mg/kg腹腔注 射，并同时予以澳甲基阿托品10mg/kg腹腔注射以减少匹罗卡品 的中枢外的副作用。在给予匹罗卡品后巧-30分钟，大鼠出现痛 性发作，最终发展成SE。如在给予匹罗卡品后1小时仍未出现 SE，可重复给予匹罗卡品。痛性发作的结果按Racine分级进行判 定，出现连续的N级以上的痛性发作为成功。 各组实验动物在各时间点，经10%水合氯醛深麻醉(800mg/ kg)后，以l00ml肝素化升生理盐水和49C4%多聚甲醛250m1进 行灌注固定。开颅取全脑置相同固定液中后固定。自额极6mm 处切取一块2mm厚冠状脑片放于49C30%蔗糖溶液中浸泡24小 时后，人恒冷切片机(一24`C)切成61im厚的切片，贴附于铬明矾 明胶处理过的载玻片上，一70℃冰箱保存。 免疫组织化学染色采用SP法。 统计学处理:皮质区丙‘侧和歹侧卜币央前吮下区):在40、10倍 光镜下用物镜测微尺分别计数200p,mx200}tm视野内各组的GD- NF,GDNFRa和Ret阳性细胞数，每只大鼠取两张切片，每张切片 计数3个视野。海马CA3区:在20x10倍光镜视野下用物镜测 微尺计数1毫米长度的海马的GDNF,GDNFRa和Ret阳性细胞 数，每只鼠计数2张切片。并计数SE后3天组海马CA3区和门 区GDNF阳性细胞和坏死神经元的百分率。实验数据以均数士标 准差表示，进行方差齐性检验，如方差齐，使用t检验，否则用秩和 检验。CA3区和门区GDNF阳性细胞与神经元坏死之间进行相关 分析。P0.05时判断有统计学意义。 结 果 光镜下HE染色可见正常对照组的神经元多呈三角形，细胞 核较大，核仁清楚，胞浆内可见深染的尼氏小体。SE后在皮质和 海马区皆可见到神经细胞不同程度的变性坏死:细胞变小、细胞呈 嗜酸性、细胞固缩深染、尼氏小体消失、神经元脱失等。 光镜下免疫组化染色结果:(1)GDNF免疫组化结果:在皮质， GDNF阳性细胞分布于皮质的第班层，正常对照组与SE后1小时 组未见到GDNF阳性细胞;GDNF阳性细胞