PMA和膜流动性对脊髓神经元中线状溶酶体影响的实验研究.pdfVIP

中 文 摘 要. 前 育 溶醉体是由单层生物膜包绕的细胞器，酸性磷酸醉是其标志 醉。近来，人们相继在20余种细胞中观察到线状溶醉体，它的功 能目前尚不完全清楚，可能参与了细胞内的物质运物。研究发现 人 在溶醉体运动过程中其形态也发生着变化，这提示我们溶醉体的 运动可能与线状溶醉体的形成有关。溶醉体膜、细胞膜和徽丝在 结构上有密切的联系。流动性是细胞膜的一个重要特征，细胞膜 流动性与线状溶醉体的关系目前尚无报道。当前人们已经在中枢 神经元内发现有线状溶醉体存在，但对其生物学性状的了解还很 有限。本实脸观寮了PMA处理资位神经元后溶醉体形态与分布 的变化并对细胞膜流动性的改变是否是影响线状溶醉体形态的一 个因素进行了初步探讨。 漪 料与方法 1.培养的脊髓神经元。取14一16日龄的Wistar大鼠胎鼠脊 位，在含10%胎牛血清的DMEM培养液中制成细胞悬液，细胞密 度为1x10个‘/毫升，接种于盖玻片上和75em}的培养瓶中，于 379C,5%CO:的孵箱中培养一周。 2.实验处理 2.1PMA处理组:向培养液中加人PMA，终浓度为50n扩ml, 3790孵育1.5小时。对照组加人等A的DMSO, 2.2亚油酸处理组:向培养液加人亚油酸，终浓度为30ug/ml, 3790姆育1小时。对照组加等t的无菌水。 ·1· 2.3组织化学研究。细胞与PMA作用后，用含2%多聚甲醛、 0.25%戊二醛的混合固定液(0.1M二甲砷酸配制，PH7.4)4℃下 固定细胞45分钟。0.1M二甲砷酸缓冲液4℃下漂洗20分钟。 ACPase组织化学选用Gomoris铅法，将细胞I于ACPase的牌育 液中，室温下反应90分钟。孵育后的细胞经1%硫化胺染色后镜 检，结果进行统计处理。 2.4电镜技术。孵育反应后，用0.1M二甲砷酸级冲液漂洗， 收集细胞，1%俄酸4℃后固定20分钟，酒精梯度脱水，丙翻f换， Epon812树脂包埋，60℃下聚合48小时，超薄切片机切片，醋酸铀 单染，JEM一1200EX透射电镜下(65XV)观察。 2.5细胞与亚油酸作用后，一部分细胞用PBS液漂洗,1:1的 。.25%腆醉和。.02%的EDTA棍合被消化，侧成细倪价浪，予护璐 中(3x1护cell/ml)。取1nADPH液与1ml细胞悬液棍合，于2590 水浴保沮30分钟。里起偏器于垂直位ti,检偏器垂直及水平位f 时侧得的荧光强度分别记为I.和I，，按下式计算黄光偏报度P二 (Il一GXIl)/(II+GxI,),G二0.96旗肠R吸枯度11“2P/ (0.46一P)，结果经统计学处理。 2.6另一部分细胞直接进行ACPase光、电镜观察，方法同前。 实 脸 结 果 一、PMA处理神经元后ACPase的分布 PKA处理后青位神经元内ACPase阳性反应产物位子施质边 缘，而且A^CPase在对照组和PMA处理组中的分布构成不同。对 照组中有75%的细胞其ACPase阳性反应产物位于核周围,8%的 细饱其ACPase阳性反应产物分布在胞质边缘PMA处理组中相 应的细胞比例分别为20%和60%。电镜下ACPase阳性反应产物 为吕色碑酸铅盐袱粒，分布在团形洛醉体和线状溶醉体。对照组 ·2 · 神经元内圆形溶醉体和线状溶酶体散在地分布于胞质中;突起内 可见线状溶醉体沿突起的纵轴走行。PMA处理组神经元胞质中 线状溶醉体的数t明显增加。 二、神经元膜流动性与线状溶醉体的关系 亚油酸处理