MPTP对小鼠圉质细胞Bcl2及Fas蛋白表达影响及尼古丁干预的实验研究.pdfVIP

曰..曰口. 中 文 摘 要 前 言 帕金森病 (PD)病因至今未明，最终都表现为中脑黑质多 巴胺 (DA)能神经元的缺失，可能通过细胞凋亡这一共同的最 后通路所致，Bd-2和Fas是重要的凋亡调控基因。近年来，应用 1一甲基4-苯基1邓乒四都比吮(MPIP)制作的PD动物模必L泛 应用于PD的实验研究。吸烟可减少PD的发病率，尼古丁对黑 质神经元变性有保护作用，其秒健未完全阐明，尼古丁对PD小 鼠黑质神经元Bcl-2,Fas蛋白表达的影响未见报道。 本实验采用MPIP带炸 C57BL小鼠帕金森病模型，急性间 断给予尼古丁，观察其运动行为改变，以及对黑质神经元Bol- 2,Fas蛋白表达的影响，探讨尼古丁对黑质细胞凋亡保护作用的 机制，可能为帕金森病的治疗开辟一个新领域。 厂实验材料 健康雄性C57BL小鼠28只，体重20士2克，由中国医科大 学动物实验中心提供。MPIP、尼古丁半硫酸盐购自美国 公司。Bcl-2,Fas免疫组化成套试剂盒购自武汉博士德公司 疫组化实验器材、药品由中国医科大学组织胚胎学实验室提供。 实 验 方 法 1.动物分组及用药:28只C57BL小鼠，随机分为4组:① 正常对照组7只;②尼古丁组7只;③MPTP组7只;④尼古丁 +MPIP组7只。 .l. MPTP组小鼠腹腔注射MPTP30mgrkg体重，连续5天;对照 组给予等量生理盐水;尼古丁组每日经腹腔注射给子2m吨体 重尼古丁，分四次间隔半小时间断给药，每次给予0.5m吨体 重，连续给药5天;尼古〕+MPIP组于每日最后一次给予尼古 丁后同时给予MPIP. 2.行为学改变的定性、定量观察 每次注射MPIP、尼古丁或生理盐水后观察小鼠行为改变， 是否出现运动减少伴震颤等帕金森病症状。给药前后进}fTl爬杆试 验及悬挂试验评分，检查是否有肢体协调运动障碍。 3.动物处死及标本采集:末次给药后24小时，生理盐水及 多聚甲醛透心灌注，取出全脑，多聚甲醛固定，石蜡包埋，黑质 位置连续冠状切片，片厚711m，供免疫组化染色。 4.Bcl-2、Fas免疫组化染色:采用链霉亲和素一生物素-酶 复合物法(SABC脚 ，按试剂盒说明书操作。 5.数据分析及统计处理 小鼠行为学观纂封旨标得分用x士s表示，Bcl-2,R‘阳性细 胞数用x士s表示，统计学分析采用两样本均数比较的t-粉验。 实 验 结 果 1.行为改变:mm〕模型组小鼠注射MPTP3分咋中后出王彩孟动减 少、静止震颤、行走缓慢伴震颤，持续约30分钟 1述表绷勃口明显。尼古丁+MPTP 射后1述表绷 J口明显。尼4 组小鼠每次注射MPTP后亦 出现上述表现，但程度减轻。对照红吸尼古丁组无 匕述表现。 2.行为学改变定量观察:各组小鼠给药前爬杆试验得分均 为9分，悬挂试验得分均为3分。第五日给药后10交陈椒组量小 卿 干试验、悬挂试验得分见表10 .2 · 表1Rfl试脸及悬挂试验得分林士s) 正常AtM, 857士053