变形链球菌在中国家庭内部传播的研究.pdfVIP

中文摘要 / 前 言 / / . 了 变 形 、 链球菌(mutansstreptococci以下简称变链)已被公认为 奈 人 夹 的 主的主要致龋菌。近年来，不少学者对变链在人群中的自然传 播，传播时间及传播阻断或延迟进行了研究。探索变链从已感染 宿主传播至未感染宿主方式及确定感染源，将有助于阻断或延迟 变链的传播。国外以往的多数研究表明变链属母子垂直传播，母 亲是儿童变链的主要来源。随着对变链传播研究的深人，越来越 多的资料表明还存在其它传播方式，如父系传播、夫妻传播和家庭 外的传播等。目前西方国家家庭内部变链传播的研究较多，我国 人口众多，幅员广阔，随着生活 龋病患病率日益增加，故 研究变链的传播机制更具有意义 本实验应用随机引物聚合酶链 反应法在国内首次对中国家庭变链的传播进行研究，以期为龋病 预防提供新思路和理论依据。 材料与方法 礴机选取沈阳一个幼儿园18名3-5岁儿童及其父母作为研 究对象。要求从三名家庭成员口腔中均能分离出变链，否则弃之， 同时对儿童的母乳时间、0-3岁时的主要照顾者、二个月内抗生 素使用情况进行调查。采样均在上午7-9时进行，由同一检查者 完成。取父母非刺激性全唾液2ml并刮取儿童左上领牙唇面颈部 1/3处牙菌斑，将样品在微量展荡器上展荡30秒后，接种于 TYCSB培养基上，厌氧培养48小时后，进行次代纯培养，将纯培 养细菌做生化实验以初步鉴定变链。分离出的菌株增菌后，用酚 一抓仿法抽提细菌DNA。采用单个引物P5’一TGCCGAGCTG 一3’，以细菌DNA为模板，进行PCR反应。取lOu1PCR反应物 加样于1.5%的琼脂糖凝胶电泳，EB染色紫外灯下观察结果。 实验结果 18个家庭中，有10个家庭同时分离出变链，共分离变链菌株 308株，平均每人10.3株。儿童变链平均有1.60个基因型，成人 平均有1.75个基因型。母子一致的有7个家庭，父子一致的有3 个家庭，家庭外传播的有2个家庭。夫妻间一致的有2个家庭，在 成人的35个基因型中，有2个可在成人间互相传播，占5.7%。儿 童变链的16个基因型中有8个与母亲的一致，有3个与父亲的一 致，6个来自家庭外，分别占50.0%,18.8%，和37.5%, 讨 论 一 随机引物PCR在鉴定变链中的应用 随机引物PCR技术(AP一PCR)无须事先知道所鉴定的DNA 序列，可鉴定细菌菌种的种系发生。目前常用于鉴定变链的分子 生物学方法有核糖型法(riboytpe)、限制性核酸内切酶分析(REA) 及AP-PCR法。核糖型法是一种精确的鉴定区分细菌异源性的 方法，其缺点是需要杂交，对实验设备要求高，而REA法对DNA 纯度要求高、量大、有时电泳条带复杂，DNA同源性分析有一定难 度。LfY等把AP一PCR法与REA法在鉴定变链的一致性上进 行了比较，一致系数Kappa值为0.87，故认为AP一PCR法可以替 代REA法，用于变链传播的研究。AP一PCR法不仅具有稳定性 强，还有其独到的优点:样品用量少、操作简便、快速、结果判断直 观，大大降低分子生物学的研究费用，适合于大规模流行病调查研 究。 二、家庭变链的传播 国外多数研究表明母亲是儿童变链的主要来源。本实验对中 国沈阳10个3一5岁儿童家庭变链的分布进行了研究，结果发现7 ·2。 名儿童变链的基因型与母亲的一致，儿童变链的16个基因型有8 个与母亲的相同，占50.0%，表明母亲是儿童变链的主要来源。Li Y等对婴儿最初从母亲获得变链的真实性进行了前瞻性研究，有 71%母子变链基因型是相似的。Kov‘对日本家庭的报道儿童与 母亲变链基因型的一致率为51.4%,RedmoI在中国湖北11个家 庭中发现6个家庭母子变链基因型一致，这与我们的结果基本一 致。母亲是儿童变链的主要来源，这提示婴儿早期通过胎盘和母 乳从母体获得被动免疫而建立起来的免疫系统，可能选择性地