意大利蜂工蜂胎抗炎免疫作用机理研究及其功效成分初步筛选.pdf

浙江大学硕上学位论 摘 要 工蜂虫蛹自古就是药膳两用食品，我国许多中药药典都有工蜂虫蛹用于疾病治疗以 及保健的记录。因其具有较高的开发利用价值，近几年己有一些研究人员对虫蛹的功效 重新进行了探讨并取得了一定成果。本实验采用酶联免疫、荧光分光、紫外分光、免疫 组化等技术，观察比较工蜂胎的水提物和醚提物对多种炎症动物模型的影响，首次在整 体水平、细胞水平、分子水平系统地研究了工蜂胎的抗炎作用及其机理，并对其抗炎免 疫成分进行了初步筛选。结果表明: 工蜂胎的水提物能够在一定程度上降低炎症区域毛细血管的通透性，能够抑制完全弗 氏佐剂引起的炎井肿胀，对角叉菜胶引起的炎性肿胀效果不明显，对油酸加LPS两次 打击所致大鼠急性肺损伤有明显的保护作用，能对抗肺水肿的产生;对慢性炎症 (棉 球肉芽肿模型)具有显著的抑制作用。而醚提物有一定的趋势，但效果并不明显。 2.工蜂胎的水提物能够减少角叉菜胶致大鼠急性胸膜炎炎症组织中PGE2和总蛋白的含 量，降低炎症组织脂质过氧化物代谢产物 (MDA)的含量，减轻炎症发生程度，抑 制炎症组织中白细胞总数的增加。工蜂胎水提物对大鼠肾上腺中胆固醇的含量和Vitc 含量影响明显，提示抗炎免疫作用有可能是依赖于垂体一肾上腺皮质系统。但工蜂胎 的醚提物对于炎症介质以及胆固醇和Vitc含量的影响不大。 3.工蜂胎水提物对急性炎症渗出液中NO及溶菌酶含量的升高表现出抑制作用，能够对 抗炎症模型内细胞因子IL-6的异常升高，对IL-2和IFN-Y影响不明显，暗示工蜂胎 水提物的抗炎免疫通过作用于B淋巴细胞系统起作用口 4.工蜂胎水提物能够在一定程度上抑制急性肺损伤大鼠支气管上皮细胞中CD54的表 达，阻止核转录因子NF-kBp65的活化，抑制大鼠支气管上皮细胞中NF-kBp65mRNA 的表达。提示工蜂胎水提物主要通过抑制炎症细胞中NF-kBp65的活化及其NF-kB p65mRNA的转录增加控制炎症反应的中心环节，使有害细胞因子的产生减少，保护 机体免受有害刺激的进一步损伤，从而达到有效抗炎目的。工蜂胎的醚提物对于CD54 的表达、NF-kBp65的活化影响不大。 浙江大学硕 卜学位论丈 5工蜂胎的功效成分可能主要存在于其水提物中，工蜂胎的水提物呈现出较为明显的抗 炎免疫效果，而醚提物有一定的抗炎趋势，但效果跟工蜂胎的全组分相比较，有一定 的差别。暗示工蜂胎对于免疫方面的作用是一个整体作用，也有可能在分离过程中破 坏了功效成分的原有状态，将其活性成分的药理学效应降低。 工蜂胎及其水提物和醚提物的急性毒性实验发现，工蜂胎水提物和醚提物的最大耐受 量均在正常剂量的600倍以上，属于无毒物质。用药期间对于胸腺等免疫器官影响不 明显，并且能够对抗炎症造模期间的体重减轻。 同时，对工蜂胎的开发利用的研究方向进行了讨论，认为工蜂胎今后的研究方向是 加工工艺、保藏方式以及药物作用机理方面的研究为主。本实验结果为工蜂胎的开发利 用提供了理论依据。 关键词:工蜂胎 工蜂胎水提物 工蜂胎醚提物 抗炎免疫 炎症介质 细胞因子 NF-kBp65 免疫组织化学 浙江大学硕 卜学位论丈 英文缩写注释 WHLP:WorkerhoneybeelarvaeandpupaeT-蜂虫蛹 WE:Waterextraction 水提物 EE:Ethalextraction 醚提物 IFN二Interferon 干扰素 TNF:丁。mornecrosisfactor 肿瘤坏死因子 IL:Interleukin 白介素 NO:Niuugeuvxide 一氧化氮 iNOS:induciblenitrogenoxidesynthetase诱生型一氧化氮合成酶 NF-kB:Nucl