人乳头瘤病毒58型E6E7融合基因突变体的转化活性及抗原性.pdfVIP

主垡避疸盘查垫!!生!旦筮箜鲞筮!翅￡!也』Q!趔：』出垫!!：!丛：堑：堕!：! ·491· ．基础研究． 人乳头瘤病毒58型E6E7融合基因突变体的 转化活性及抗原性 王鹤于继云李力 【摘要】 目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因突变体的转化活性及抗原性。 方法分别定点突变HPV58型E6和研基因中3个氨基酸的密码子，去除突变后的E6和E7基因的 终止码并将其基因片段融合，突变修饰后的基因命名为HPV58mE6E7。将重组质粒转染NIH／3T3细 胞，plRES-neo-HPV58mE6E7转染组为实验组，pIPES-neo-HPV58E6E7转染组为阳性对照组，pIPES— mF五E7融 neo空载转染组为阴性对照组。流式细胞术、免疫荧光和Westernblot检测转染细胞HPV58 合蛋白的表达，软琼脂集落形成和裸鼠皮下成瘤实验检测HPV58mE6E7融合蛋白的转化活性。以 HPV58 mE6E7融合基因为靶抗原构建DNA疫苗，免疫小鼠后采用酶联免疫吸附试验检测免疫鼠血 清中特异性抗体，酶联免疫斑点法检测免疫鼠脾淋巴细胞中可分泌1干扰素的特异性CD8+T细胞 E6肼融 数。结果将pGEM．Teasy／HPV58mE6E7和pMD-18T!HPV58E6E7质粒分别测序，HPV58 合基因与HPV58型E6和E7基因标准序列的同源性达100％，并证实点突变成功。稳定转染HPV58 mE6E7和HPV58E6E7的NIH／3T3细胞表达率分别为70．3％和84．1％。实验组和阳性对照组 HPV58 mF_五E7和HPV58E6研融合蛋白的相对表达水平分别为2．1±1．7和3．8±1．4，阴性对照组 HPV58 mE6E7和HPV58E6口融合蛋白呈阴性表达。实验组和阴性对照组未见集落形成；阳性对照 组有31个集落形成，其中50个细胞的集落10个。实验组和阴性对照组细胞接种裸鼠后，在4周内 均未成瘤；而阳性对照组中有6只裸鼠形成肿瘤。以HPV58mE6E7融合基因为靶抗原的DNA疫苗 具有良好的抗原性，抗体滴度为25600，特异性免疫斑点数为(218．8±34．4)个，明显高于对照组。 E6E7基因可融合表达，并在消除其转化活性的同时保留其抗原性，可作为 结论修饰后的HPV58 HPV58阳性相关肿瘤治疗性DNA疫苗的靶基因。 【主题词】人乳头瘤病毒58；基因，E6；基因，E7；生物转化；疫苗，DNA；抗体 human 58E6E7fu$ion Transformationand ofthe papillomavirustype gene activityantigenieity ofGynecologicOncology，CancerHosphalofGuangxi mutant形t^临胁+，ⅢJi—yun，LILi．+Department Medical University．Nanning530021，China author：LILi，Email：lili_temp@hotmail．corn Corresponding To a and vaccine human Objectivedevelopprophylactictherapeuticagainst 【Abstract】 58．associatedcervical itstransformationand carcinoma，and activity papiUolnavirus(HPV)type