乳腺癌耐药细胞来源的Exosomes的分离鉴定及其在耐药传递中的作用.pdfVIP

主堡脏擅苤盍垫!堡笙!且筮!鱼鲞筮!塑￡塾垫!堕尘：塑墅塾垫!垒，∑尘：堑：堕!：! ·165· ．基础研究． 乳腺癌耐药细胞来源的Exosomes的分离 鉴定及其在耐药传递中的作用 许金金李文静钟山亮 李秀娟 陈志远胡清唐金海赵建华 【摘要】 目的探讨乳腺癌多西紫杉醇(DOC)耐药细胞(MCF．7／DOC)和阿霉素(ADM)耐药细 胞(MCF．7／ADM)对Exosomes的分泌功能及其在耐药性传递中的作用。方法采用超速分级离心的 blot法检 方法，从乳腺癌耐药细胞培养液上清中提取Exosomes，透射电镜下观察其形态特征，Western 测乳腺癌耐药细胞和Exosomes中标志蛋白的表达情况。利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧 光蛋白(GFP)的乳腺癌亲本敏感细胞系GFP-MCF-7／S，通过细胞间耐药实验和Exosomes传递耐药性 实验观察耐药性传递现象。结果 与MCF．7／S细胞相同，MCF-7／DOC和MCF-7／ADM细胞也分泌 nm。Exosomes仅表达Exosomes标志性蛋 Exosomes，均为圆形或椭圆形的膜性囊泡，直径为30～100 7／S细胞共培养72h后，荧光显微镜下观察各组细胞的荧光表达情况无明显差别。但在加入化疗药 物DOC或ADM处理24h后，MCF．7／DOC+GFP—MCF-7／S组细胞的荧光细胞平均存活率为65．5％， 的荧光细胞平均存活率为53．6％，亦明显高于MCF-7／S+GFP—MCF．7／S组细胞(25．4％，P0．001)。 h后，荧 h 光显微镜下观察各组细胞的荧光表达情况无明显差别。但在加入化疗药物DOC或ADM处理24 后，MCF-7／DOC来源的Exosomes+GFP．MCF-7／S组细胞的荧光细胞平均存活率为59．9％，明显高于 GFP．MCF．7／S组细胞的荧光细胞平均存活率为58．3％，亦明显高于MCF-7／S来源的Exosomes+GFP— MCF-7／S组细胞(27．2％，P0．001)。结论乳腺癌细胞间存在着耐药性传递的现象，Exosomes可能 是耐药信息传递的转运载体。 【主题词】 细胞系，肿瘤；乳腺肿瘤；Exosomes；多西紫杉醇；阿霉素；抗药性，肿瘤 Extractionand ofexosomesfrom breastcancercellsandtheir identification drug-resistant potential roleincell-to·cell transferXu Shanliang，Li drug-resistanceJiajia‘，丘眈硒ng，Zhong Xiujuan，Chen Clinical Cancer Jinhai，Zhao五anhua．+Centerof LaboratoryScience，Jiangsu Zhiyuan，肌Qing，Tang Fourth Medical Hospital，theAffiliatedHospitalof№蟛，lg University，ⅣⅡ蛹喈210009，China author：ZhaoJianhua，Email：触碰跚@siaa．corn Corresponding To whetherdocetaxel—resistant doxorubicin- 【Abstract】Objectiveexplore