1，8—二桉油素用作病理组织石蜡切片透明剂的实验研究.DOCVIP

临床医学论文-1，8—二桉油素用作病理组织石蜡切片透明剂的实验研究 【摘要】? 目的：对1，8—二桉油素用作病理组织石蜡切片透明剂的可行性进行实验研究，并探索其使用方法。方法：用二甲苯作对照，用1，8—二桉油素做实验研究，采用较硬、中等硬度和较脆的三种常见临床病理组织为实验材料。采取常规的病理组织取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、贴片、烤片及染色过程，研究1，8—二桉油素代替二甲苯作为透明剂的可行性。结果：1，8—二桉油素能使酒精脱水组织完全透明，1，8—二桉油素组透明时间略长于二甲苯透明组。1，8—二桉油素组透明组织切片及染色良好。结论：1，8—二桉油素可以取代二甲苯用于病理组织透明。 【关键词】? 1，8—二桉油素；石蜡切片；透明 　　二甲苯是病理制片必须使用的有机溶剂，二甲苯作为病理石蜡切片透明剂效果优良，但随着其对人体的毒性研究进展发现，长期使用二甲苯可对机体构成众多危害［1］。研究证实，吸入二甲苯蒸气可引起眼、鼻、喉的刺激，高浓度时可致严重的呼吸困难，甚至死亡。二甲苯为苯的同系物，可导致红细胞和白细胞升高［2］或降低［3］。易对胎儿产生毒性［4］和引起早期流产［5］。卫生部在《工业企业设计卫生标准》中对二甲苯的最高容许浓度做了具体规定［6］，卫生部已把二甲苯中毒定为百种职业病中的一种。为此，我们采用1，8—二桉油素取代二甲苯用于病理组织制片透明，以避免因为使用二甲苯而引起职业病的发生。 　　1? 材料与方法 　　1.1? 材料? 1，8—二桉油素(1,82Cineole):由华海医用电子仪器有限公司提供，是加有抗氧化剂的1，8—二桉油素混合物。分子式C10 H180。酒精(alchol)：分析纯，天津市天达净化材料精细化工厂。石蜡(parnffin)：熔点58 ℃，上海华灵康复器械厂。二甲苯 (Xylene) ： 分析纯，成都化学试剂厂。苏木素(Hematoxylin) ：英国进口，上海化学试剂分装厂提供。伊红（eosin）：The Coleman Bell co., Norwood, O.,U.S.A. 中性树胶：中国上海标本模型厂。 　　1.2? 仪器设备? 温箱：BHT ARTHUR H.THOMAS CO.U.S.A.摊烤片机：YT6B型，湖北孝感亚光医用电子技术研究所。包埋机：YT6B型， 湖北孝感亚光医用电子技术研究所。切片机：Leica RM 2135，德国。 　　1.3? 组织取材? 选用病理石蜡切片中属于较硬的乳腺癌组织60块，属于中等硬度的结肠癌组织60块，属于较脆的肝癌组织60块，取材大小为2 cm×1.5 cm×0.3 cm，为医院病理科通常的取材大小,分为二甲苯组与1，8—二桉油素组，每组中每一种组织30块,一共用于制作切片的组织为180块。 　　1.4? 组织固定、脱水、透明及浸蜡? 4%中性甲醛固定8 h［7］。固定结束后，流水冲洗2 h，常规梯度酒精脱水，酒精浓度从70%到100%。二甲苯组用分析纯瓶装二甲苯透明，1，8—二桉油素组用1，8—二桉油素透明。二甲苯和1，8—二桉油素都用两缸透明，以保持透明剂的纯度和浓度,使用60 ℃温箱浸蜡,把预先熔化的石蜡分两缸浸蜡。 　　1.5? 包埋、切片、贴片、烤片及染色? 使用与浸蜡相同的石蜡，包埋机包埋。轮转式切片机连续切片，切片厚度为5 μm。载片涂抹粘片剂后贴片。烤片机烤片,温度70℃，时间1 h。苏木素—伊红对比染色，中性树胶封固。 　　2? 结果 　　2.1? 脱水时间? 70%~90%酒精脱水时间采用固定时间脱水，二甲苯组与1，8—二桉油素组各个酒精浓度脱水时间无增减。两组梯度酒精脱水时间基本相似，无统计学差别，见表1。 　　表1? 二甲苯组与1，8—二桉油素组梯度酒精脱水时间（略） 　　注：1，8二桉油素组和二甲苯组比较，P0.05。 　　2.2? 透明时间? 在使用酒精脱水之后，使用1，8—二桉油素组透明时间稍长，见表2。 　　表2? 二甲苯与1，8—二桉油素组织透明时间（略） 　　注：1，8二桉油素组和二甲苯组比较，P0.05。 　　2.3? 浸蜡时间? 浸蜡分为乳腺癌组织、结肠癌组织和肝癌组织三组，以组为单位浸蜡。二甲苯与1，8—二桉油素组织用相同的浸蜡时间，见表3。 　　表3? 二甲苯与1，8—二桉油素组织浸蜡时间（略） 　　2.4? 组织切片及染色? 组织包埋后，使用轮转式切片机进行切片，组织能切取连续切片，切片厚薄均匀。切片容易进行染色，细胞浆和细胞核染色鲜艳，色饱和度满意 ，对比清晰。组织无明显收缩和变形。 　　3? 讨论 　　1，8—二桉油素是桉油提纯物，桉油是桉树(Euca lyp tus)叶和果实中油腺细胞分泌出来的芳香精油。桉树是桃金娘科( Myrtaceae) 植物，原产于澳大利亚东南角的