天然丝素蛋白的酶水解研究.pdfVIP

人然扮系r自的rfi水解训议 jTij ,., 摘 要 本文在比较儿种蛋白酶水解丝素效果的基础 用茹三酮比色法 和SDS凝胶电泳法，ill细研究f水解效果最好的弹性蛋白酶水 解丝素过程中，温度、pH值、酶用量、底物浓度以及水解时间对反 应速度、水解程度的影响，确定了酶促反应的一些催化特性:最适温 度为450C;最适pH为8.5;动力学常数K,。值为4.3mg/mlo 另外，用氨基酸分析、红外光谱、热分析以及 X衍射等手段对 酶解产物的组成和结构特点作了分析。6(-果表明，丝素经弹性蛋白酶 水解后，产生少量的沉淀 (Cp)，这部分分子以0折叠构象为主，呈 紧密的结晶聚集态;水溶部分 (CS)与再生丝素溶液相似，是完全无 规卷曲的结构。同时，两部分氨基酸的组成是有较大差异的，简单氨 基酸 (Gly,Ala,Ser)在沉淀部分含量很高，达90%:而带有较大 侧基的氨基酸(Tyr,Phe)在水溶部分含量增加，为15%左右。，卜一 关键词 丝素 弹性蛋白酶 酶水解 水解产物 第 I页 一生一二土生业上{些生些1d 扣 yF Abstract Onthebasisofeffectcomparisononhydrolysisofsilkfibroinby proteinases,elastasewasselectedasthemosteffectiveenzymetobe studiedindetail.Withthemethodsofninhydrincolorimetryand SDSgelelectrophoresis,theeffectsofinfluencingparameters includingtemperature,pHvalue,enzymedose,substrateconcentration, andhydrolytictimewereinvestigated.Resultsindicatesomehydrolytic characteristics,theoptimumtemperatureandpHvalueis45C，8.5 respectively,kineticvalueK.is4.3mghnl. Moreover,thecompositionandstructureofhydrolysateswere determinedbyaminoacidanalysis,infraredspectrum,thermalanalysis andX-raydiffraction.Resultsshow thatprecipitatepart(Cp)only possessesalo\vratio,and13-sheetisthemainconformation,withthe compactstructureofcrystal;thesolutionpart(Cs),however,isthe random-coilconformationasregeneratedfibroinsolutionMeanwhile,the individualamino-acidcontentofCpandCsdiffersgreatly.Gly,Alaand SeraminoacidsoccurmostlyinCppartbypercentageof90% on quantity,TyrandPheaminoacids,however,riseto15%inamountinCs part. KeywordsFibroin EnzymatichydrolysisElastaseHydrolysate 第 2 贝 人然丝索蛋自的t9t水解fl(究 第一部分