金属硫蛋白在乙醇致大鼠脑毒性中作用研究.pdfVIP

华中科技大学同济医学院 硕士研究谧论式 金属硫蛋白在乙醇致大鼠脑毒性中的作用研究 姓 名 周义军 导 师 曹玉广 摘 要 ff(景:金属硫蛋白是一种应激蛋白，可被多种因素诱导表达。许多研究 证实，急性乙醇摄入可诱导金属硫蛋白表达增高，并存在性别差异少)一一 目的:本实验通过测定大脑、小脑、海马、肝、肾中金属硫蛋白及锌、 铜、钙的含量，以了解长期 ((3个月)乙醇摄入对不同组织中金属硫蛋 白基因表达和金属分布的影响，并探讨乙醇诱导金属硫蛋白基因表达的 机制;同时通过体外实验研究乙醇对神经胶质细胞存活率和抗氧化系统 的影响，以及金属硫蛋白和硒对乙醇细胞毒性的抑制效应，从而进一步 分析乙醇中毒的机理。 份法:体内实验，Wistar大鼠随机分“个‘组，雌雄各半，”另给“予。、 10%,30%,50%乙醇0.5m1进行灌胃染毒，每天一次连续3个月。染 毒后，经断头处死动物，分离大脑、小脑、海马、肝、肾，采用锅一血 红蛋白饱和法测定样品中金属硫蛋白含量，原子吸收火焰法测定样品中 锌、铜、钙含量。应用SAS软件对测定结果进行分析，比较这些组织 中金属硫蛋白及金属含量在不同剂量组、不同组织中的差异，以及金属 硫蛋白的变化与相应组织中金属的改变之间的关系。 体外实验，从新生 (出生后1天)大鼠大脑中分离神经胶质细胞， 华中科技大学同济医学院 硕士研究健论次 进行原代培养。对原代培养的神经胶质细胞进行乙醇染毒。细胞生存毒 性实验分为3个组:1.乙醇毒性组，乙醇染毒剂量浓度分别为。、0.05%, 0.10%,0.20%;2.乙醇加金属硫蛋白组，乙醇浓度为0.10%，金属硫蛋 白的剂量分别为0,50,100,200pmoU1;3.乙醇加硒组，乙醇浓度为 0.10%，硒浓度分别为0,1,2,3mg/l。在乙醇对细胞谷肤甘肤过氧化 物酶活性及丙二醛合成影响试验中，乙醇浓度为。.02%，金属硫蛋白和 硒的浓度不变。细胞存活率通过MTT试验进行测试，谷肤甘肤过氧化 物酶活性及细胞培养液中丙二醛含量用相应试剂盒进行测定。 结果:长期乙醇摄入后，大鼠大脑、小脑、海马中金属硫蛋白水平呈上 升趋势，且这种影响存在性别差异。雄性大鼠在30%乙醇剂量组中，大 脑、小脑、海马金属硫蛋白水平分别为对照组的1.38,1.56,1.28倍 (P0.05)，在50%乙醇剂量组中分别为1.61,1.53,1.45倍 (P0.05); 雌性大鼠在30%乙醇剂量组中，金属硫蛋白表达增加的效应较显著，大 脑、小脑、海马中金属硫蛋白水平分别为对照组的1.39(P0.05), 3.08(P0.05),1.79(P0.05)倍。肝金属硫蛋白雌雄组均没有明显改变， 肾中金属硫蛋白表达轻微增高。另外，长期乙醇摄入后，大鼠脑、肝等 组织中锌水平明显增高，并存在性别差异。铜含量在小脑和海马中有一 定的改变，钙没有明显变化。组织中金属硫蛋白与锌水平呈现明显一致 性。 休外原代培养的神经胶质细胞中加入乙醇后，细胞生存活性受到抑 制。加入0.05%,0.10%,0.20%乙醇后，细胞相对生存率分别下降了 35.3%,38.3%,43.4%M O.05)。本试验中金属硫蛋白3个剂量组对乙 华中科技大学同济医学院 硕士研究生论次 醇的细胞生存毒性效应没有观察到明显影响，加入硒可明显抑制乙醇的 细胞生存毒性，1,2,3mg/1的硒组细胞相对生存率分别上升 19.0%, 33.7%,31.6%(P0.05)。在细胞培养液中同时加入乙醇和金属硫蛋白 或硒，金属硫蛋白或硒均可抑制乙醇对谷肤甘肚过氧化物酶活性的影 响，但相同剂量的金属硫蛋白不能抑制过氧化产物丙二醛的生成，而硒 .、-·-一 ，-..一 一 二 卜一少一 则可在2,3mg/l剂量组明显抑制丙二醛的生成夕 结论:长期 ((3个月)乙醇摄入后，大鼠脑、肾中金属硫蛋白合成有增 加的趋势，并存在性别差异，肝中金属硫蛋白的合成没有变化。乙醇摄 入同时影响了组织中锌水平的改变，且金属硫蛋白