褐牙鲆干扰素调节因子5(IRF-5)的克隆与表达分析.pdf

褐牙鲆干扰素调节因子5(IRF-5)的全长cDNA克隆与表达 分析 摘要 olivaceus)是东北亚地区重要的养殖鱼类品种之一。 褐牙鲆(Paralichthys 近年来，随着褐牙鲆室内养殖的迅速发展，各种严重的病害随之发生，尤其是病 毒性病害。它们给牙鲆养殖业带来了巨大的经济损失。由于干扰素系统在机体抗 病毒免疫中发挥重要的作用，因此本研究的目的是为了丰富牙鲆干扰素(IⅢ) 系统知识，它将对防治这种重要的经济鱼类的病毒性病害具有重要的意义。 干扰素调节因素50RF．5)已经被证明是一个关键的转录的介导者，它能够调 节I型IFN和炎性细胞因子的表达。在这项研究中，我们采用同源PCR和cDNA ofcDNA 末端快速扩增(RapidAmplificationends，RACE)方法从褐牙鲆脾组织中 克隆出IRF．5的全长cDNA分子和基因组DNA。褐牙鲆IRF．5 cDNA长1869bp， 断的氨基酸序列与其他鱼类的IRF．5有61．1．81．9％的一致性，且拥有DNA结合 个核定位信号(NLSs)等保守功能域，它们都存在于己知的IRF．5中。系统进 化分析显示褐牙鲆IRF一5属于脊椎动物中的硬骨鱼IRF5亚群。褐牙鲆IRF．5 mRNA在所有检测的组织中组成型表达，在鳃和头肾组织中表达水平较高，在 脑、肝和皮肤中表达水平较低。 IRF．5基因的表达情况在褐牙鲆中进行为期7天的分析检测，我们选取了鳃、 头肾、脾和肌肉组织进行实验。首先对褐牙鲆分别进行淋巴囊肿病毒(LCDV) I：C)腹腔注射，然后检测IRF．5基因7天的表达水平变 和多聚寡核苷酸(Poly 化情况。数据显示，褐牙鲆IRF一5基因的表达受LCDV轻微的上调表达，但是 I：C处理的诱导在不早于2天的时候才 诱导时间明显提前了；与此相比，经Poly 开始，而且_在所有的四个检测组织中的表达更强、更持续，峰值出现得也较晚。 I：C处理后晚而持久的上调表达暗示了IRF一5基因可能是一种 IRF．5基因在Poly I：C诱导的I型IFNs带动的。 干扰素刺激基因(ISG)，其上调表达是由Poly 本项研究为深入了解褐牙鲆的干扰素信号系统和开展褐牙鲆病毒病害的免 疫防控工作奠定了基础。 I 关键词：干扰素调节因子5；褐牙鲆；淋巴囊肿病毒；Po YI：C；基因表达分析； 干扰素刺激基因 in Molecularand oflRF--5 ExpressionAnalysis Cloning olivaceus Flounder，Paralichthys Japanese Abstract ofthemost oBvaceus)，one important Japaneseflouder(Paralichthys in