回阳生肌膏对人慢性皮肤溃疡创缘成纤维细胞增殖调控的影响.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 慢性皮肤溃疡是临床常见病，可继发于很多疾病，治疗十分棘手。到目前为止，其 发病机理仍在探索之中。在针对这种修复失控(修复不足)的众多研究中，成纤维细胞 (FB)以其在修复中扮演着不可或缺的重要角色而成为关注、研究的焦点。中医药对此 类疾病具有确实疗效，认为本病最终往往发展为久不愈合的阴证创疡，治疗以回阳生肌。 本实验即以人皮肤成纤维细胞(HFB)为切入点，选用回阳生肌膏，从细胞分子生物学角 度深入研究其作用机制。 本文首先对HFB增殖调控与慢性皮肤溃疡及外用生肌方药治疗慢性皮肤溃疡的研究 现状进行了简要综述。在了解研究现状的基础上进行本实验。 实验分为两部分：首先，观察回阳生肌膏水及醇提取物对正常皮肤成纤维细胞(nHFB) 和慢性皮肤溃疡创缘成纤维细胞(uHFB)增殖的影响，然后初步探讨它们对uHFB增殖调 控的机制。实验结果如下： 首先建立慢性皮肤uHFB细胞系及nHFB细胞系。在倒置相差显微镜下观察两种细胞， 形态差别较大：uHFB体积大，胞体薄，分支多，形状不规则，nHFB则体积小，胞体丰满 晶亮，呈梭形或多边形，分支少，生长旺盛，排列呈漩涡或火焰状。通过对两种细胞生 长曲线及群体倍增时间的测定，显示uHFB较nHFB生长缓慢，倍增时间延长22．79h。 采用alarmar 响。结果显示，水提物在0．075～2．4 或PO．01)，在0．15～1．2 醇提物在0．027～0．425 uHFB则在0．027～0．213 物作用于nHFB和uHFB后，均能在一定浓度范围内促进两种细胞的增殖。其中水提物 1．2mg／L、醇提物0．213mg／L作用最为明显，因此作为后续各实验的实验浓度。 体外细胞伤口实验是体外细胞迁移和增殖能力总和的体现。建立体外uHFB和nHFB 细胞伤口模型，以nHFB形成的伤口为对照，观察回阳生肌膏水及醇提取物对体外细胞伤 口愈合的影响。结果显示，实验中uHFB细胞伤口的愈合速度较nHFB创口模型显著减慢， 各时间点与nHFB组有显著差异，分别PO．01：回阳生肌膏水及醇提取物均能显著提高 两种细胞伤口的愈合速度；但uHFB用药组仍不及nHFB用药组愈合速度快：并且实验发 现醇提物比水提物作用更明显。 在确定回阳生肌膏水、醇提取物具有促进HFB增殖的作用后，对其作用机制进行初 步探讨。 (1)采用流式细胞仪检测回阳生肌膏水、醇提取物对uHFB和nHFB细胞周期的影响： 及增殖指数(Proliferation 回阳生肌膏对人慢性皮肤溃疡创缘成纤维细胞增殖调控的影响 G2／M期比例影响不明显，但可增加PrI指数(PO．05)。 蛋白：PCNA免疫化学结果显示，细胞对照组PCNA表达量低，醇提物及水提物组则在作 组在Oh均与细胞对照组各时相无明显差异；水、醇提物组均在作用1h时c—Fos表达增 时，水、醇提物组表达均继续增加(PO．01)，且与各自前一时相相比有显著差异(PO．01)， 而醇提物组较水提物组增加仍极显著(P(O．01)；作用3h时，醇提物组表达开始下降， 但与对照组仍有显著差异，而水提物组表达仍继续增加，与2h时醇提物的高表达无显著 平较低且时相之间无差异(P70．05)；水、醇提物Oh与细胞对照各时相比较无差异；水、 醇提物作用lh，c～Myc表达略有增加，但与细胞对照各时相及0h均无显著差异：各自作 用2h～3h，c-Myc表达持续增加，但醇提物组比水提物组增加更为显著(PO．01)。 小结：慢性皮肤溃疡缠绵难愈与创缘成纤维细胞增殖障碍有关，实验建立uHFB和 异。回阳生肌膏水提物及醇提物对uHFB和nHFB的增殖均有明显促进作用，同时对细胞 迁移也有较好的促进作用；其促增殖作用机制初步研究表明，回阳生肌膏水提物及醇提 实现对uHFB增殖的正向调控。 关键词：成纤维细胞，回阳生肌膏，慢性皮肤溃疡，增殖 英文摘要 3 ABSTRACT ulcerof commonclinical be to Chronic disease，can