黑线仓鼠（Cricetulus+barabensis）微卫星引物筛选及应用.pdf

誓88276毒 摘要 以野外捕捉的黑线仓鼠为材料，从肝脏组织中提取基因组DNA，以pUcl9 质粒为载体构建小片段基因组文库，利用PcR法从中筛选微卫星座位。在PCR 法筛选中使用由(cA)。／(GA)。寡核苷酸引物和pucl9质粒多克隆位点两侧的 M13Primers M3和RV引物分别配对组成。通过对经过鉴定的3000多个克隆 的筛选，获得65个可能含有微卫星的重组阳性克隆。测定这65个阳性克隆 的序列，其中27个克隆序列不含有明显的微卫星；在其他38个克隆中共得 到60个微卫星序列。首次得到的60个黑线仓鼠微卫星序列在GenBank注册， 序列号为D0235662，DQ270160，DQ270163，DQ270166，DQ270170～ DQ270172，DQ286857～DQ286860，D0270173～DQ270177，DQ342058～ 非完美型6个，占10％；复合型18个，占30％。在复合型中，复合完美型5个， 复合非完美型13个。利用BLAsT序列分析软件对GenBank数据库进行检索， 没有发现同源性一致的相应微卫星序列，表明本文得到的黑线仓鼠微卫星序 列都是首次发现的。此外，黑线仓鼠微卫星的重复次数主要集中在20次以 下，而20次以上的比较少见。 从这60个微卫星序列中选取重复区域长、侧翼序列好的座位使用 Lasergene6．O和Primer5．0软件设计微卫星序列引物，并事先设计好相应 的参数，共设计出9对不含茎环和二级结构的引物，长度在18bp左右。将9 对引物迸一步经过8％聚丙烯酰胺凝胶电泳检验筛选，共获得5对具有多态性 的引物，用这5对引物对曲阜市吴村、房山土门，平邑县蒙山三地的黑线仓 鼠种群进行遗传多样性分析，平邑蒙山种群遗传多样性最高。遗传遗传距离 和聚类分析发现，曲阜吴村、房山土门两地种群的遗传距离相对较小，但是 总体而言三个种群之间遗传差异较小。为进一步开展黑线仓鼠种群分子生态 学等研究建立了微卫星分子标记，从而为黑线仓鼠及其近缘种群的分子生物 学研究奠定了基础。 关键词：黑线仓鼠 微卫星 遗传多样性 Abstract Panjalsma珏*纽sen mO地璩a珏3000dOnes genomi。librafy∞mpos砖of w毡sscfe嚣黼dwi|hPCR tc吐嫩唾鞋e茔雕|e∞搬b趣a嫩pos撕Veelo珏然e雌tai燃珏g of in聪R 蒯cfosatellite∞quenccsD诞脚泌妇黼6翻商．髓e研mers獬ed M13 al wefe Pnme措M3，M13n．强e菇RVwhi随locatedbothsidI端of mu獭ple donesiteof andmicrosatellite puel9 primers(CA)8，(GA)8designodaccording to∞re motifsofmic∞s越eni圭e。65rccombinamclones repeats pOsiliVe microga钯lliteObt越ned wefc and联} 。0nt蔽n讯g byscrc锶in鬈 seqlle弹^ed 搬{efosatell量teloc至wefe协雌d蠹糊巍38dOnes．G嚣nB姐l(建ccession糊瑚be堪Of 诵eseclonesareD啦356iS2 DQ270160，DQ2钧i63，DQ27016羲 DQ270170书Q270172， DQ286857∞Q286860D_Q270173∞Q270i77，