大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡相关基因表达及依达拉奉干预.pdf

中文摘要 L } 背景与目的脑缺血损伤后细胞凋亡受诸多基因调控。由死亡受 的凋亡途径中起着关键作用。Daxx则在基因转录和细胞凋亡两方面 发挥重要作用。FAP一1是Fas信号转导中的负性调节因子，也是唯一 缺血再灌注损害中的研究报道极少。自由基清除剂依达拉奉是目前临 床证明有效的神经保护剂，它能够减少脑缺血损伤后细胞凋亡，但其 影响细胞凋亡的机制尚不清楚。本研究通过检测局灶性脑缺血后 FADD、FAP l和IDaxx等基因在大鼠脑内的表达变化，以探讨其在脑 缺血损伤中的作用，并以依达拉奉作干预，观察其对上述基因和细胞 凋亡的影响，以期为进一步研究脑缺血后细胞凋亡分子病理机制以及 脑梗死的防治提供实验基础。 型，缺血2小时后恢复再灌注，药物组在脑缺血再灌注即刻和12小 时各腹腔注射依达拉奉3mg／kg，模型组注射等量的生理盐水。Longa’S 的5级标准评分法评价神经功能缺损。再灌注后1小时、3小时、6 小时、12小时和24小时处死动物。HE染色和Nissl染色观察病理学 变化，免疫组织化学、RT—PCR、Westernblot等方法分别检测缺血 达变化；免疫荧光激光扫描共聚焦显微镜观察FADD和Daxx在神经元 的定位：末端标记法原位检测神经细胞凋亡。 组再灌注24小时HE染色显示出典型的坏死灶和神经元丢失，Nissl 染色可见细胞肿胀，尼氏体消失，依达拉奉可以减轻上述损害及大鼠 神经功能缺损评分(PO．05)。(3)正常组和假手术组偶尔可以检 测到凋亡细胞：模型组再灌注3小时凋亡细胞开始增加，以后时间点 持续增加，24小时达到高峰；依达拉奉能够减轻再灌注6小时以后 量的FADD mRNA和蛋白表达；模型组FADDmRNA和蛋白表达变化一致， 在再灌注3小时开始上升，12小时达到高峰，24小时显著下降；依 — 正常组和假手术组可以检N-N较高的DaxxmRNA和蛋白表达；模型组 I Daxx mRNA和蛋白表达变化一致，在再灌注3小时开始上升，此后持 续上升，一直至24小时仍维持较高水平表达；依达拉奉能显著下调 检测到微量的FAP—imRNA和蛋白表达；模型组FAP—ImRNA表达在再 灌注i小时开始明显上升，3～6小时达高峰；其蛋白表达I小时开 始增加，6～12小时达高峰，24小时显著下降；依达拉奉治疗对FAP—i 灌注1～3小时开始上升，12小时达高峰，24小时显著下降；依达拉 奉能使其蛋白表达显著降低(PO．05)。(8)激光扫描共聚焦显微 镜显示FADD的免疫活性位于胞浆，Daxx的免疫活性从胞核向胞浆移 位。并可见一些碘化丙啶着色的神经元的皱缩，标志着细胞死亡。 和mRNA表达增加，可能参与脑缺血后促凋亡作用。(2)大鼠脑缺血 急性期FAP—ImRNA和蛋白表达增加，可能参与脑缺血后抗凋亡作用。 白或／和mRNA表达降低，减轻细胞凋亡，从而减轻脑缺血损伤，可能 是该药保护脑缺血后损伤的作用机制之一。(4)脑缺血后FADD的免 疫活性位于胞浆，Daxx的免疫活性从胞核向胞浆移位。 氧化应激，依达拉奉 —●{l●—， II ABSTRACT