人脐带间充质干细胞在新型神经支架内生长状态初步研究.pdfVIP

中文摘要 人脐带问充质干细胞在新型神经支架内生长状态的 初步研究 摘 要 cord 目的：近年来，脊髓损伤(spinal 国的发病率越来越高，究其原因与交通、建筑等行业高速发 展不无关系。其高致残率给社会与个人带来沉重的经济及心 理负担，尤其是脊髓横断性损伤，．神经功能的恢复几乎无望。 如何使离断的脊髓得到有效连接，使受损的神经元功能得到 恢复是医学界急需解决的难题。随着组织工程学的飞速发展， 一种更先进的SCI修复理念逐步形成，即对．SCI的有效治疗 必须重建轴突与靶细胞间的连接才有根本意义，而组织工程 支架植入或许是最有可能达到这一理想要求的有效途径。为 此，我们拟应用幼年家犬脊髓经化学萃取方法制作的一种新 umbilical 型神经生物支架，观察人脐带间充质干细胞(human cord stem mesenchymal 生长情况，为该支架联合人脐带MSCs移植在完全横贯性脊 髓损伤动物模型及临床应用奠定基础。 方法：1、神经生物支架的制备：切取幼犬胸段脊髓长约 5cm，浸入40ml／L 夜；蒸馏水浸浴3h后放入40mM／L脱氧胆酸钠蒸馏水溶液中， 置4C冰箱12h。以上步骤共重复3次。萃取后的脊髓支架置 4℃冰箱备用。2、人脐带间充质干细胞培养：取足月妊娠剖 宫产健康胎儿的脐带，以PBS充分冲洗，剔除脐带动、静脉， 将其余的脐带间质组织切割成直径约lmm大小的组织块，在 中文摘要 00u／ml 含有20％的胎牛血清、2mM左旋谷氨酰氨(L．Glu)、1 青霉素和‘1 养。原代培养5—7天后，显微镜下可见大量细胞自组织块中 游出，向外呈放射状贴壁生长。待细胞达到80％一90％汇合 后，加入O．2％胰酶消化传代。收集第三代人脐带MSCs行流 式细胞学检测细胞表面抗原证实其为脐带间充质干细胞后冻 存备用。3、冻存的人脐带MSCs复苏与神经生物支架相容性 0 研究：对冻存的人脐带MSCs复苏使细胞密度达到1×l6／ml， bFGF、 用微量注射器分点注入支架内，置入含有BDNF、 小时，应用冰冻切片及Hitachi扫描、透射电镜观察人脐带 MSCs在不同时间点在支架内生长发育情况。 结果：l、脊髓经化学萃取后依然呈长扁圆形、乳白色外 观，但较前增粗，后正中裂加宽，质软。HE染色可见经化学 方法萃取后的脊髓中无任何细胞，可见疏松的蜂窝状结构。 扫描及透射电镜可见脊髓的细胞结构消失，残留的细胞骨架 和胶原样结构呈蜂窝状。2、经人脐带组织块培养约5天后， 可见大量细胞自组织块游出，于周边向外贴壁呈放射状生长， 形态较均一，呈长梭形。1O天达到80％--90％汇合，镜下可 见细胞胞浆丰富，轴突伸长，多角状。消化后以1：2—1：3 的比例传代细胞，接种约30分钟后细胞迅速贴壁，经换液完 全汇合时镜下可见细胞排列紧密，无序生长，经传代培养3 代后细胞形态未见明显变化。3、人脐带MSCs接种于脊髓支 架内行体外条件培养48、72、96小时，分别行冰冻切片HE 染色、扫描及透射电镜观察。观察可见萃取的的脊髓支架内 有细胞在蜂窝样结构内生长。扫描电镜观察可见细胞黏附于 中文摘要 支架上，并有突起生成。 结论：冻存的人脐带MSCs复苏后注入自行研制的神经 支架内在体外培养，可见注入的人脐带MSCs在网架上贴伏 并生长良好，由此证实了外源性细胞与此种支架有良好的生 物相容性，而网格状结构又为细胞的生长提供了适宜的微环 境。因而，这种新型支架联合人脐带MSCs移植可能为