实验性自身免疫灰质病模型IgG相关研究.pdf

中文摘要 实验性自身免疫灰质病模型IgG的相关研究 摘 要 lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(Amyotrophicsclerosis， ALS)是一种进展性以选择性上、下运动神经元变性为特征 的神经变性疾病。ALS病人多在起病后3．5年内死亡。目前对 ALS没有特殊治疗方法。关于该病的病因和发病机制还不明 确，曾提出多种假说，包括兴奋毒作用、自身免疫异常、氧 化应激、神经元调亡及线粒体功能障碍等。越来越多的证据 表明自身免疫尤其是免疫球蛋白G(IgG)在ALS发病中起重 autoimmune 要作用。实验性自身免疫灰质病(experim6ntal matter 990年建 gray 立的，其临床症状和病理改变与ALS相似，因为此模型是由 免疫介导的，所以通过它研究免疫机制在ALS发病中的作用 有重要的参考价值。我们建立实验性自身免疫性灰质病模型， 通过对动物病情变化的观察、电生理检查、组织化学和免疫 组化染色，探讨IgG损伤运动神经元的可能机制，为自身免疫 因素在ALS发病中的作用提供实验依据。 方法： 1实验动物：4月龄雄性白化病远交系HaIrtley豚鼠 2实验分组 2．1EAGMD组：将牛脊髓前角加入到PBS和福氏佐剂中做成 匀浆免疫20只豚鼠，以豚鼠出现肢体无力定为模型动物，无力 起始时间定为发病时间，以动物不能翻身定为取材时间，发 病到取材的时间为病程。 中文摘要 2．2免疫对照组：将PBS和福氏佐剂做成匀浆免疫豚鼠，以与 EAGMD动物同日取材的动物计为免疫对照组动物。 2．3正常对照组：用PBS皮下注射豚鼠，以与EAGMD动物同 日取材的动物计为正常对照组动物。 3肌电图检查每四周给动物做一次后肢肌电图。 4组织化学与免疫组化染色 4．1取豚鼠新鲜股直肌行皿染色，动物麻醉后用4％多聚甲醛 一O．05％戊二醛．O．2％苦味酸灌注，取腰膨大和后肢骨间肌。 4．2固定后的腰膨大做甲苯胺蓝染色，以计算运动神经元数 目，FITC一羊抗豚鼠IgG染色以了解IgG的沉积情况；骨间肌做 神经肌肉接头处IgG沉积的荧光双标染色：神经肌肉接头用罗 丹明一Q一金环蛇毒素标记，显红色荧光，IgG用FITC．羊抗豚鼠 IgG染色，显绿色荧光，同一个位置双重染色表明神经肌肉接 头处IgG沉积阳性，同一标本中IgG沉积阳性神经肌肉接头数 与所检的总的神经肌肉接头数的比例，计为神经肌肉接头处 IgG沉积率。 5统计学分析 t检验分析正常对照组、免疫对照组与EAGMD组腰膨大 运动神经元数在统计学上的差异，卡方检验分析3组在神经肌 肉接头IgG沉积率的差别，相关分析明确IgG在神经肌肉接头 沉积比率与EAGMD动物病程的关系。，检验水准Q=O．05。 结果： 1在20只用牛脊髓前角匀浆免疫的豚鼠中有9只出现肢体进 1 病程分别为3，4，4，7，14，24，29，42，64天，平均2 天；免疫对照组和正常对照组由与EAGMD同日取材的动物 中文摘要 各9只组成；肌电图检查：EAGMD动物均出现正尖电位， 对照组未见异常；EAGMD动物肌肉船染色，出现成束萎缩， 提示失神经改变，对照组未见异常。 2腰膨大甲苯胺蓝显示EAGMD组运动神经元数目明显少于 比率(27．6％)明显高于免疫对照组(5．6％)和正常对照组(4．1％)， 尸O．O 1；神经肌肉接头处IgG沉积率与动物病程呈负向直线 关系，r=O．64，尸O．05。 的沉积，其病程都在1周内，免疫对照组与正常对照组未发 现脊髓运动神经元中有IgG的沉积。 结论： 1建立了EAGMD动物模型，其后肢肌电图出现正尖波，肌肉 病理显示神经源性受损，脊髓运动神经元丢失明显，这些改 的一个有价值动物模型。 2