腈水解酶基因bxn的结构与功能研究.pdfVIP

　生物技术通报 ·研究报告 ·　　　　　　　　　　 2005 年第 2 期 B IO T EC HN OL OGY　BULL E TI N 　　　　　　　　 腈水解酶基因 bxn 的结构与功能研究 1 1 2 1 张锐 　王清路 　倪万潮 　郭三堆 ( 1 2 ) 中国农业科学院生物技术研究所 ,北京 　100081 ; 江苏省农业科学院遗传生理研究所 ,南京 　2 100 14 摘 　要 : 　前期研究发现腈水解酶基因 bx nR D 127 表达产物无功能 ,测序证明该基因结构中存在 4 处突变 。 本文对 4 处突变逐点进行结构与功能回复突变研究 ,发现其中2 处突变能使基因表达产物丧失功能 ,1 处使基因表 达产物活性降低 ,1 处对基因表达产物活性基本无影响 。进一步将完全回复突变的 bx n 基因转化烟草 ,获得的转基 因烟草具有抗溴苯腈除草剂特性 ,结果证明结构中的 3 处突变与活性中心功能有关 。 关键词 : 　溴苯腈除草剂 　腈水解酶基因　转基因烟草 Study on the Construction and Function Relation of Nitrilase Gene bxn Zhang Rui1 　Wang Qinglu1 　Ni Wanchao2 　Guo Sandui1 ( 1 I ns t it ute of B iotechnology , Chi nese A ca demy of A g ricul t ural S ciences , B eij i ng 　100081; 2 I ns t it ute of A g robiol og ical Genet ics an d P hy s iology , J i angs u A ca demy of A g ricul t u ral S ciences , N anj i ng 　2 100 14) Ab stract : 　Prop hase research of bx nR D 127 gene indicat ed it s exp ressing p ro duct had no nit rilase activit y . Se quencing dat a showed t here were 4 sit es of mut ant s in it . In t hi s p ap er , we st udied t he four mut ant s sit e by sit e , two of t hem made t he nit rilase unfunctionally , one made t he nit rila se activit y decrea sed , t he ot her had no influence on t he activit y . Then , t he comp let ely recruit ed mut ation bxn gene wa s exp ressed ult eriorly in t ran sgenic tobacco p lant s which could resi st ant to t he brom bx nnil herbicide . Tho se